24小时热门版块排行榜    

查看: 1042  |  回复: 8

xiaomckeyan

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助HRM筛查中的困惑

求助各位大神:小的现在刚学着做HRM筛查突变。结果曲线上可明显看出有分型。可是测序结果却都是一样的。已经复查了,用的样品引物都没问题,实在想不通为啥。

求助HRM筛查中的困惑
IMG_20170609_193216.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbass533

禁虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-16 08:06:04
本帖内容被屏蔽

2楼2017-06-15 10:45:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaomckeyan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bbass533 at 2017-06-15 10:45:54
你是怎么测序的?HRM灵敏度很高的,看曲线是明显有差异,测序结果一致,说不过去。

测序结果比对过确实是欲研究序列。我用的测序引物和HRM引物不同,前者产物更长。现在怀疑HRM引物有问题,可是引物引用自权威的文献,并且我也BLAST过:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/primertool.cgi?ctg_time=1497541511&job_key=nJZD3Xe9ehVdL-oq50rOGJ1R3yqwQsQ3sQ,确实可用。实在想不明白,难道厂家合成错了?!
3楼2017-06-16 01:11:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbass533

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

4楼2017-06-16 11:43:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaomckeyan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by bbass533 at 2017-06-16 11:43:52
你直接将HRM后的产物送去测序的吗?送前是否点样看过条带,单一吗?...

不是,我是用另外的引物扩增后送测序。因为该引物产物更长。测序前条带非常好。

发自小木虫Android客户端
5楼2017-06-16 15:50:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbass533

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

6楼2017-06-16 17:02:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaomckeyan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by bbass533 at 2017-06-16 17:02:37
那这个引物你是否进行HRM分析?是突变的吗?
有可能你送测序用的引物是非特异性引物,所以测出来的结果是一样的。建议你用筛选出突变的引物进行PCR,然后产物点样看看是否单一,再送去测序。...

谢谢你的建议。测序用的引物条带单一清晰,且结果blast后确包含有待测片段,该片段并无如此多的突变频率,所以考虑测序引物没有问题,问题可能在HRM引物上。现在正在摸条件用HRM的引物跑普通pcr,看看到底p的是什么片段。。

发自小木虫Android客户端
7楼2017-06-16 18:52:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbass533

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

8楼2017-06-17 13:06:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaomckeyan

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by bbass533 at 2017-06-17 13:06:18
祝好运~...

谢谢!
9楼2017-06-17 22:27:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaomckeyan 的主题更新
信息提示
请填处理意见