应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » miRNA荧光定量pcr，跪求大神指点！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2711  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

桃仁兔丁

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] miRNA荧光定量pcr，跪求大神指点！ 已有1人参与

研究内容是实验组感染病毒后，realtime检测细胞中miRNA表达有无变化。
已经卡了三个月了，毫无进展，十分绝望。
1.最开始用人的原代T细胞和其他两种T细胞系来做，u6为内参，引物均为广州锐博生物订购的茎环引物。然而实验结果有一个很严重的问题就是u6的ct值极不稳定，甚至倾向于随病毒感染上调的趋势，无法定量其他miRNA的表达。
但找了大量文献，并且组内讨论认为"实验因素引起u6变化"的可能性微乎其微。
2.随后继续在T细胞系里验证，同时将GAPDH也作为内参，结果显示gapdh在细胞间稳定，而u6继续不稳定。
3.以上结果均在abi 7500测得，所有miRNA和u6从逆转录一步就使用特异茎环引物，逆转录的RNA模板均为2ug；罗氏Mix；u6 cDNA稀释100倍，其余cDNA稀释5倍。
4.这个月换了贴壁细胞来做，之前做过预实验结果和T细胞中一致，实验组u6的ct值都会变小；然而适逢7500热盖坏了，就去借用公用的abi stepone plus来跑realtime.可是现在的问题是换了仪器完全做不出来了？实验程序、体系都没变…前两次跑完全没有扩增曲线，跑胶也确实无扩增，今天事先做了普通pcr检测有产物才拿去做realtime,我调了调基线阈值，好歹有一些孔有数值了，但是数值非常随机毫无规律…比如我做了4个复孔，ct能达到19和38的差异…完全绝望…这到底是我的问题还是stepone和7500哪里不同…
每天都重振旗鼓调整实验找问题，但是每天都毫无结果…金币不多跪求师兄师姐们指点…
附今日的扩增曲线图…

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-06-04 19:59:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vmp651312

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
4个复孔模板是同一cDNA的话，我感觉是加样的问题。cDNA有没有混匀啊？
赞一下 回复此楼
6楼2017-06-05 11:37:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

桃仁兔丁

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
miRNA荧光定量pcr，跪求大神指点！

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2017-06-04 20:03:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

桃仁兔丁

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
miRNA荧光定量pcr，跪求大神指点！-1

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2017-06-04 20:05:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

桃仁兔丁

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
miRNA荧光定量pcr，跪求大神指点！-2

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-06-04 20:05:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 各位老师好，我的一志愿为北京科技大学085601材料专硕 +12 Koxui 2026-03-28 12/600 2026-03-31 23:17 by wwytracy
[考研] 考研生物与医药调剂 +6 铁憨憨123425 2026-03-31 6/300 2026-03-31 17:48 by 544594351
[考研] 362求调剂 +9 西南交材料专硕3 2026-03-31 9/450 2026-03-31 16:25 by w虫虫123
[考研] 本科211生物医学工程085409求调剂339分 +7 里子木yy 2026-03-29 7/350 2026-03-31 14:35 by fmesaito
[考研] 生物考研337分求调剂 +4 cgxin 2026-03-30 6/300 2026-03-31 14:18 by 记事本2026
[考研] 272求调剂，接受跨专业调剂！ +3 闲鱼卢 2026-03-31 3/150 2026-03-31 13:00 by 替代品000
[考博] 材料专业申博 +5 杜雨婷dyt 2026-03-29 5/250 2026-03-31 11:19 by oooqiao
[考研] 08工科，295，接受跨专业调剂 +6 lmnlzy 2026-03-30 6/300 2026-03-31 10:04 by cal0306
[考研] 085600材料与化工调剂 +16 kikiki7 2026-03-30 16/800 2026-03-31 10:03 by 氯化亚硝酰
[考研] 282求调剂 +3 呼吸都是减肥 2026-03-31 3/150 2026-03-31 10:00 by wangjy2002
[考研] 323分 食品与营养调剂 +3 嘿ooo 2026-03-31 3/150 2026-03-31 09:38 by longlotian
[考研] 材料与化工调剂一志愿大连海事085600，349 +6 吃的不少 2026-03-30 6/300 2026-03-31 04:17 by fmesaito
[考研] 福建理工大学材料学院先进合金团队招收考研调剂学生 +3 大华金商都 2026-03-30 4/200 2026-03-31 01:04 by 方英俊602
[考研] 279求调剂 +12 j的立方 2026-03-29 12/600 2026-03-30 20:30 by dick_runner
[考研] 085600 286分 材料求调剂 +11 麻辣鱿鱼 2026-03-27 12/600 2026-03-30 19:33 by Wang200018
[考研] 085600，材料与化工321分求调剂 +10 大馋小子 2026-03-28 10/500 2026-03-29 23:35 by 飞行日记西
[考研] 数一英一271专硕（085401）求调剂，可跨 +7 前行必有光 2026-03-28 8/400 2026-03-28 23:22 by 小木虫tim
[考研] 085405 考的11408求各位老师带走 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 09:19 by 乐呵呵的追梦人
[考研] 285求调剂 +4 AZMK 2026-03-27 7/350 2026-03-27 20:59 by AZMK
[考研] 085602化学工程求调剂。 +4 平乐乐乐 2026-03-26 4/200 2026-03-26 17:57 by fmesaito
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭