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我好暴躁啊

新虫 (小有名气)

[求助] 双酶切连接不成功 已有7人参与

双酶切连接这么难吗,怎么就连不上!目的片段3300,载体3000,酶是NEB的。,双酶切后10ulT4连接体系,体积比设了好几个,转化子长了好多,挑菌,菌液PCR都是假阳性,欲哭无泪( ˙-˙ ),该怎么办?

双酶切连接不成功


双酶切连接不成功-1


双酶切连接不成功-2


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我好暴躁啊

新虫 (小有名气)

引用回帖:
39楼: Originally posted by 原来,是这样 at 2017-06-02 23:29:56
和我猜想的一样,你回收浓度太低了,才60ng,完全配不出一个好体系。胶回收的时候溶胶液重复过柱3次,洗脱液也过柱2次,片段3000多才60多ng,mol数也就很低了,自然就会形成空载了。然后就是你为什么要单酶切之后灭 ...

一样的,都是37度

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49楼2017-06-05 10:03:20
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2楼2017-05-30 22:01:09
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luoyl210

新虫 (著名写手)

我们一般克隆的假阳性比较多,亚克隆不太会出现假阳性

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3楼2017-05-30 22:13:28
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-30 22:40:29
包给我做吧~~~呵呵。大片段本身就不太好连,另外,你酶切位点没有选紧邻的两个吧。。那样可能切不开哈。。然后,你回收片段关注下260/230,最好2左右,最差也要大于1.5,要么成功率会很低。
4楼2017-05-30 22:32:27
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