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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » hi-Tail法 克隆启动子
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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jinnini125

木虫 (小有名气)

[求助] hi-Tail法 克隆启动子 已有1人参与

请问，如何知道我用hi-tailPCR克隆得到的序列，是不是启动子序列呢？

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1楼 2017-05-22 21:36:33
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pfy323103

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jinnini125 at 2017-05-24 16:06:58
你好，功能验证，是不是可以构建pro载体，验证启动子活性？
...

功能验证时，可以选择合适的表达载体（植物中较常用表达载体之一：如 PBI121），将表达载体自身的启动子（PBI121是35s启动子）酶切掉，连入你自己得到的启动子序列，看能否驱动gus报告基因表达就可以说明你得到启动子是否具有活性了。

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7楼2017-05-24 17:21:27
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-23 07:41:18
1.看克隆得到的序列与基因编码区是否有重叠区，2.做启动子核心元件及相关元件预测分析，3.构建表达载体，看能否驱动载体下游标记基因表达。
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2楼2017-05-23 01:26:17
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jinnini125

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2017-05-23 01:26:17
1.看克隆得到的序列与基因编码区是否有重叠区，2.做启动子核心元件及相关元件预测分析，3.构建表达载体，看能否驱动载体下游标记基因表达。

您好，我的基因序列是通过同源克隆后比对出来得到的，没有基因组和转录组数据。得到的序列和我的基因有150左右bp的重叠区，其余的都不知道是什么……

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3楼2017-05-23 10:31:34
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pfy323103

新虫 (初入文坛)
有150多bp重叠，可以认为扩增序列是在你基因基础上的步移。但还得看你的序列长度，若觉得有些短，可以在第一次步移的基础上继续步移。可在一些启动子预测软件上进行初步预测，不过最后还要通过实验进行功能验证才能确定究竟是不是启动子。
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jinnini125
4楼2017-05-24 14:42:38
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