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jinnini125

木虫 (小有名气)

[求助] hi-Tail法 克隆启动子 已有1人参与

请问,如何知道我用hi-tailPCR克隆得到的序列,是不是启动子序列呢?

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pfy323103

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by jinnini125 at 2017-05-24 16:06:58
你好,功能验证,是不是可以构建pro载体,验证启动子活性?
...

功能验证时,可以选择合适的表达载体(植物中较常用表达载体之一:如 PBI121),将表达载体自身的启动子(PBI121是35s启动子)酶切掉,连入你自己得到的启动子序列,看能否驱动gus报告基因表达就可以说明你得到启动子是否具有活性了。

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7楼2017-05-24 17:21:27
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-23 07:41:18
1.看克隆得到的序列与基因编码区是否有重叠区,2.做启动子核心元件及相关元件预测分析,3.构建表达载体,看能否驱动载体下游标记基因表达。
2楼2017-05-23 01:26:17
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jinnini125

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2017-05-23 01:26:17
1.看克隆得到的序列与基因编码区是否有重叠区,2.做启动子核心元件及相关元件预测分析,3.构建表达载体,看能否驱动载体下游标记基因表达。

您好,我的基因序列是通过同源克隆后比对出来得到的,没有基因组和转录组数据。得到的序列和我的基因有150左右bp的重叠区,其余的都不知道是什么……

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3楼2017-05-23 10:31:34
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pfy323103

新虫 (初入文坛)

有150多bp重叠,可以认为扩增序列是在你基因基础上的步移。但还得看你的序列长度,若觉得有些短,可以在第一次步移的基础上继续步移。可在一些启动子预测软件上进行初步预测,不过最后还要通过实验进行功能验证才能确定究竟是不是启动子。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2017-05-24 14:42:38
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jinnini125

木虫 (小有名气)

送红花一朵
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4楼: Originally posted by pfy323103 at 2017-05-24 14:42:38
有150多bp重叠,可以认为扩增序列是在你基因基础上的步移。但还得看你的序列长度,若觉得有些短,可以在第一次步移的基础上继续步移。可在一些启动子预测软件上进行初步预测,不过最后还要通过实验进行功能验证才能 ...

好的, 谢谢你!!我再继续设计引物,继续往前走。

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5楼2017-05-24 15:54:32
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jinnini125

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by pfy323103 at 2017-05-24 14:42:38
有150多bp重叠,可以认为扩增序列是在你基因基础上的步移。但还得看你的序列长度,若觉得有些短,可以在第一次步移的基础上继续步移。可在一些启动子预测软件上进行初步预测,不过最后还要通过实验进行功能验证才能 ...

你好,功能验证,是不是可以构建pro载体,验证启动子活性?

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6楼2017-05-24 16:06:58
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pfy323103

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by jinnini125 at 2017-05-24 15:54:32
好的, 谢谢你!!我再继续设计引物,继续往前走。
...

不客气,加油!good luck

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8楼2017-05-24 17:22:05
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jinnini125

木虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by pfy323103 at 2017-05-24 17:22:05
不客气,加油!good luck
...

真心感谢

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9楼2017-05-24 20:22:50
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10楼2017-08-17 20:02:03
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