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w雨过天晴j

新虫 (初入文坛)

[交流] western blot新抗体无条带

Western blot,新买的novusbio公司的抗体(鼠抗),小鼠肝脏组织蛋白上样48ug,还是看不见目的条带,此基因的mRNA水平在后面几个样品是显著下降的,但是此抗体连清晰的条带都看不到,预测大小在58KD左右,是这个抗体不好,还是我做的有问题?封闭是5%BSA室温一小时;一抗是按说明书1:500用BSA5%配的,孵育过夜4度;二抗是5%BSA配的鼠抗1:2000室温一小时。

western blot新抗体无条带
图片1.jpg
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小小虫小虫

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我们当时是用的5%的牛奶封闭的

发自小木虫Android客户端
4楼2017-05-21 13:17:28
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F翔T

银虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-20 22:24:23
虽然总蛋白量挺多,但是可能是你的目的蛋白比较少。组织蛋白一般背景都比较深,所以抗体浓度就很重要了,如果太高就很容易背景深,多洗一洗也可以减少背景。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2017-05-20 17:59:59
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
全换成奶粉配   含tween

发自小木虫Android客户端
3楼2017-05-21 06:59:15
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小小虫小虫

新虫 (初入文坛)

5楼2017-05-21 13:17:57
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