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xingkong544

铜虫 (小有名气)

[求助] 高效液相色谱测单糖(紫外检测器) 已有2人参与

各位虫友们,本人已被这个问题困扰很久,求助万能的虫友们…我想咨询下,Pmp衍生化测单糖,对单糖的浓度有什么要求吗?浓度梯度是怎么确定的啊?我用的单糖的浓度梯度是0.2g/L~1g/L共5个浓度梯度…发现峰面积并不是成比例的…心累啊…再者,PMp的浓度按文献稀释了10倍,峰高还是3000mA左右…会不会太高…和衍生物的峰高放在一起,谱图画面有点不和谐啊!对于PMp过量的问题,要达到多少就可以呢?有什么要求吗?这个衍生化反应的彻底吗?查了几篇文献,并没有看到这方面的说法…还请虫友们指教…

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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by xingkong544 at 2017-05-17 09:44:31
您好,我把原溶液按比例稀释后又做了一遍,发现所有的单糖几乎会在同一个位置出峰,(因为杂峰比较多,只能先单个单糖跑,确定他的出峰位置,再跑混标。我单跑6种单糖的时候,发现每种单糖的出峰时间非常相似,根本 ...

浓度梯度做出来的峰面积线性较差,说明线性范围的浓度点选择不合适,即浓度过高或者过低,建议从较低浓度(接近定量限)往高浓度进样,再确定合适的线性范围。对于衍生,要选择合适的衍生浓度,太高,会影响其他目标物,太低,衍生不完全,所以建议配置衍生试剂的梯度浓度,确定最佳衍生溶液浓度。对于单糖分离,如果分不开,还是以优化方法为主,分离方法优化完毕后再进行线性范围、精密度、回收率等方法学考察。希望对你有帮助!
10楼2017-09-12 22:46:22
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shi102241218

木虫 (著名写手)

你的浓度太高了,这个浓度应该用示差折光检测器。照着100到1000倍稀释吧

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2楼2017-05-11 10:33:30
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xingkong544

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by shi102241218 at 2017-05-11 10:33:30
你的浓度太高了,这个浓度应该用示差折光检测器。照着100到1000倍稀释吧

好的,谢谢您的意见。我按照您的意见再做一次,那我是不是可以把PMp浓度降一点?如果按文献中的0.5M感觉是理论量的千倍了快…会不会超出检测上限…

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3楼2017-05-11 10:54:53
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shi102241218

木虫 (著名写手)

信号只和糖浓度相关,和别的没关系

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4楼2017-05-11 17:09:22
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