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MarchZR

银虫 (小有名气)

[求助] 请问G418为什么要做预实验最佳杀伤浓度确定? 已有2人参与

没做过这个实验,知道要做预实验确定最佳杀伤浓度,但是不知道为什么?
是这样吗  确定了最佳杀伤浓度之后,在目的基因转染到细胞后,判断是否转染到细胞的染色体基因上了,第一次用这个浓度的抗生素加到细胞中(不做预实验,不知道浓度从哪入手),因为转进去的质粒已经含有了抗性,所以细胞不会死亡,会继续生长,以此来筛选阳性克隆,是这个意思不?如果细胞死了,就是不能一上来加的浓度就把细胞直接都杀死,所以要做预实验。。。?
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sundan611

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
MarchZR: 金币+30, ★★★很有帮助, thanks~ 2017-05-18 13:36:42
G418是用来筛选外源基因是否成功转染细胞的一种方法,先拿普通细胞用不同浓度的G418来做梯度筛选,确认能使细胞致死的最小浓度后再来筛选你的转染细胞,如果细胞不死 代表转染外源基因成功,你理解的对
2楼2017-05-09 11:00:41
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sundan611

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

浓度的确定 需要参考相关文献
3楼2017-05-09 11:01:27
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不同细胞对G418的敏感程度不一样,还是需要你做个简单的梯度浓度确认一下的,就是在参考浓度上下2-3倍梯度 稀释几个浓度点,确认能够100%杀死未转染细胞的浓度
4楼2017-05-10 11:49:26
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