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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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FionaD

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 关于基因克隆 已有1人参与

在配制氨苄LB固体和液体培养基的时候，氨苄加的太少了，这对连接转化后涂平板和挑菌摇菌有影响么？还有在做回收最后一步时，离心后总是得不到足够剂量的回收产物是为什么？(比如加了15μl的Elution,离心后只有5μl左右)

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1楼 2017-05-08 13:08:58
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预估预估

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
影响不大，但建议一般多加。氨卞青霉素主要是抑制细菌生长。

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我就是我，我就是人间不一样的烟火。
2楼2017-05-08 13:29:59
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FionaD

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
2楼: Originally posted by 预估预估 at 2017-05-08 13:29:59
影响不大，但建议一般多加。氨卞青霉素主要是抑制细菌生长。

可是现在用的氨卞加少了的固体和液体培养基，要不就是长出来的板密密麻麻白白的长成一片，要不就是正常长了但是摇菌摇不出来是什么原因呢？

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3楼2017-05-08 16:39:34
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小薇家智慧树

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-08 21:10:01
回收指用试剂盒进行gel回收或者clean up?过柱子得到一点点产物?    那应该是你离心不充分，加大转速或者时间

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凡有所学，皆有所成；得之勿喜，失之勿忧；越幸运，越努力。
4楼2017-05-08 17:23:20
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小薇家智慧树

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
3楼: Originally posted by FionaD at 2017-05-08 16:39:34
可是现在用的氨卞加少了的固体和液体培养基，要不就是长出来的板密密麻麻白白的长成一片，要不就是正常长了但是摇菌摇不出来是什么原因呢？
...

一般得不到阳性克隆主要问题在连接转化上，连接产物有没有验证过?

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凡有所学，皆有所成；得之勿喜，失之勿忧；越幸运，越努力。
5楼2017-05-08 17:26:35
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hx814102

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
抗生素加少了，有影响，容易长杂菌！elusion肯定会有所损失、建议离心完一次、再重复加到吸附柱上、重复洗脱一次、可以增加洗脱浓度！

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Everydayisanewday!
6楼2017-05-08 22:38:40
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bestzdz

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
抗生素加少了，可以在涂板的时候在平板上再涂一层
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学海无涯，乐在其中；谨言慎行，惜时自勉！
7楼2017-05-09 09:10:57
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justwantwhy

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
AMP加少了，对连接产物转化长菌没影响，不过就是可能有杂菌，不好挑到目的菌

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8楼2017-05-09 10:31:11
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justwantwhy

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
胶回收后不是长时间保存，而是直接连接的话，最后一步还是用灭菌超纯水回收好些，没什么离子，自我感觉不会影响连接反应体系

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9楼2017-05-09 10:33:49
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Mix-T

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
抗生素浓度低，筛选效率会降低，容易出现假阳性。离心后收回量少可能在加样时未加在膜中央？可能残留在收集柱上。
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10楼2017-05-09 15:18:08
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