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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 问个很Low的问题，关于PCR扩展的
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hsnr

木虫 (小有名气)

[交流] 问个很Low的问题，关于PCR扩展的

进行PCR扩增时，需要设计待扩增基因的两条上下游引物，但有两个问题不明白：
    1、由于加入的引物有限，随着扩增出的基因数增加，引物应该不够才是，但实际中并没有发生这种情况，是什么原因？
    2、上下游引物是指同一条链的上下游吗？如果是互补链上的，并不在同一条链上，延伸时怎么终止的？
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1楼2017-05-04 17:06:10
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MAS_rice

至尊木虫 (著名写手)
★
hsnr(金币+1): 谢谢参与
1引物都是过量的，2前引物其实就是正义链的一段序列，后引物也就是反义链的一段序列，这段序列是与正义链互补的。

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6楼2017-05-06 08:37:29
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Real000Lee

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by hsnr at 2017-05-06 18:20:12
如果是这样，就可能造成扩增出来的片段长度和所需要的不一致？片段有长有短？...

刚开始会，但是之后的PCR过程会以之前的产物为模板，即便是延伸过了，以他为模板复制互补链时引物也只结合在对应位置，久而久之长于目的链的DNA比例会越来越低，由于复制是以指数级增加链的个数，这些到最后基本就可以忽略不计了。你画个图就明白了。
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11楼2017-05-07 16:19:02
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pepsi-zy

新虫 (初入文坛)
★
hsnr(金币+1): 谢谢参与
理论上加入的引物都是够的吧

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3楼2017-05-05 22:54:22
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zzzzzzz830

新虫 (初入文坛)
★
hsnr(金币+1): 谢谢参与
来混个金币

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4楼2017-05-06 01:04:59
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hsnr

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by pepsi-zy at 2017-05-05 22:54:22
理论上加入的引物都是够的吧

由于引物是人工合成的，不可能达到扩增后基因片段的数量吧？
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5楼2017-05-06 08:11:50
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dadaoxing

禁虫 (著名写手)
★
hsnr(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
7楼2017-05-06 09:48:05
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dadaoxing

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
8楼2017-05-06 09:49:10
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Real000Lee

新虫 (初入文坛)
★
hsnr(金币+1): 谢谢参与
大家说过的我就不说了，我解释一下怎么终止延伸的，其实也很简单酶工作也是有效率的，每分钟延伸bp数是相对稳定的，你设置的延伸时间到了，开始下一个循环，温度变高自然就停止了

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9楼2017-05-06 17:18:16
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hsnr

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by Real000Lee at 2017-05-06 17:18:16
大家说过的我就不说了，我解释一下怎么终止延伸的，其实也很简单酶工作也是有效率的，每分钟延伸bp数是相对稳定的，你设置的延伸时间到了，开始下一个循环，温度变高自然就停止了
...

如果是这样，就可能造成扩增出来的片段长度和所需要的不一致？片段有长有短？
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10楼2017-05-06 18:20:12
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xxl520zry2楼
2017-05-04 17:45   回复  
hsnr(金币+1): 谢谢参与
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beryl622312楼
2018-12-08 11:51   回复  
hsnr(金币+1): 谢谢参与
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