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PCR 过程中遇到的各种奇怪问题
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问题1:之前设计的引物上游是BamH 1 的酶切位点,以基因组DNA为模板能P出来目的片段,然后发现位点有问题,重新换成了Pst1 的位点,引物的退火温度和GC含量都没有变,然后就P不出来了,但是把模板换成之前构建好的质粒就可以P出来 问题2:PCR产物跑出来有1000bp左右,但是切胶回收之后再进行鉴定发现目的片段到4000bp了 问题3:从基因组上P下来的目的片段能够顺利的连接上T载体,但是从构件好的质粒上P下来额片段就连接不上(做过重复试验)。 这是最近实验遇到的一些特别奇怪的问题 ,希望论坛里的大牛能给解答一下 万分感谢!@biostar2009@wizardfan@youlinglyw |
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