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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR 过程中遇到的各种奇怪问题
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喜灬欢

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR 过程中遇到的各种奇怪问题

问题1：之前设计的引物上游是BamH 1 的酶切位点，以基因组DNA为模板能P出来目的片段，然后发现位点有问题，重新换成了Pst1 的位点，引物的退火温度和GC含量都没有变，然后就P不出来了，但是把模板换成之前构建好的质粒就可以P出来

问题2：PCR产物跑出来有1000bp左右，但是切胶回收之后再进行鉴定发现目的片段到4000bp了

问题3：从基因组上P下来的目的片段能够顺利的连接上T载体，但是从构件好的质粒上P下来额片段就连接不上（做过重复试验）。

  这是最近实验遇到的一些特别奇怪的问题 ，希望论坛里的大牛能给解答一下

  万分感谢！@biostar2009@wizardfan@youlinglyw
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1楼 2017-05-02 19:23:20
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喜灬欢

新虫 (初入文坛)
来人给帮帮忙啊

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2楼2017-05-02 21:52:36
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欢喵

新虫 (小有名气)
再重复做做，听着都很奇怪

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3楼2017-05-09 20:23:18
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