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Rjy123

新虫 (初入文坛)

[求助] 老师您好,做pcr目的基因有缺失,老是p不出来条带,换了好几... 已有1人参与

老师您好,做pcr目的基因有缺失,老是p不出来条带,换了好几套引物,还是没有目的条带,请老师能给一些相关建议么?

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范威21003

铁杆木虫 (小有名气)


Rjy123(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-26 16:39:13
如果是知道正常序列,想要看一下目前目的基因的缺失情况,可以选择进行多片段的引物设计,就是将一整段分成几个若干部分,引物设计的时候可以重复100多个bp,然后去测序,

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2楼2017-04-26 07:59:32
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修香恋

铜虫 (小有名气)

是用的基因组为模板,还是cDNA?
3楼2017-04-26 11:08:39
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bestzdz

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
去Blast检测引物的特异性,引物的特异性很关键
学海无涯,乐在其中;谨言慎行,惜时自勉!
4楼2017-04-26 16:51:26
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Rjy123

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 范威21003 at 2017-04-26 07:59:32
如果是知道正常序列,想要看一下目前目的基因的缺失情况,可以选择进行多片段的引物设计,就是将一整段分成几个若干部分,引物设计的时候可以重复100多个bp,然后去测序,
...

好的,谢谢您!

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5楼2017-04-26 23:59:45
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Rjy123

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 修香恋 at 2017-04-26 11:08:39
是用的基因组为模板,还是cDNA?

您好,我的实验是以基因组为模板。

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6楼2017-04-27 00:00:37
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Rjy123

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by bestzdz at 2017-04-26 16:51:26
去Blast检测引物的特异性,引物的特异性很关键

好的,谢谢您!

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7楼2017-04-27 00:02:15
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Cruiser肖

金虫 (正式写手)

如果实在有些基因很难构建,买一个质粒便宜的不过几百

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8楼2017-04-27 00:13:11
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