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xiaohhh

银虫 (小有名气)

[求助] PCR,P出的条带在核酸胶孔跑不下来 已有1人参与

如图所示,是五个相似的质粒做的定点突变,P的全质粒,温度梯度。其中三个有不同程度的条带跑不下来的现象。
转化后,只有第一个转化不成功,因为其所有条带都不正常。
求指导,把第一个条带p出正常的条带。
1.突变的该位点,在his标签附近,GC含量较高,第一个GC含量60%,Melting temp: 75.1°C
2.有判断过是不是模板被蛋白污染的问题,但根据其他几个的对照分析,其他的不同温度就有不同的结果,感觉应该不是这个原因。PCR,P出的条带在核酸胶孔跑不下来
IMG_4097.JPG
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sheng_1210

新虫 (小有名气)

我也是跑不出去孔,不知道什么原因

发自小木虫IOS客户端
2楼2017-04-25 23:17:11
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borrysa

金虫 (正式写手)

3楼2017-04-26 06:41:05
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你质粒P前有跑过吗?
采菊东篱下,悠然见南山。
4楼2017-04-26 08:01:16
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xiaohhh

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 781055707 at 2017-04-26 08:01:16
你质粒P前有跑过吗?

有跑过,没有在胶孔跑不下来的情况
5楼2017-04-26 08:41:02
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xiaohhh

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by borrysa at 2017-04-26 06:41:05
感觉是胶被gDNA污染了

胶被污染了?可是有的行,有的不行啊
6楼2017-04-26 08:42:22
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安群星

新虫 (初入文坛)

楼主,请问你扩增的全质粒有多大呢,用的什么酶?我最近也在扩增全质粒,大小6500bp左右,几次尝试都没有成功,请求帮助

发自小木虫IOS客户端
7楼2017-04-26 08:57:38
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xiaohhh

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 安群星 at 2017-04-26 08:57:38
楼主,请问你扩增的全质粒有多大呢,用的什么酶?我最近也在扩增全质粒,大小6500bp左右,几次尝试都没有成功,请求帮助

我的质粒大小和你差不了太多,酶是诺唯赞的phanta,还有primerstar,高保真的
8楼2017-04-26 09:05:39
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