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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR，P出的条带在核酸胶孔跑不下来
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xiaohhh

银虫 (小有名气)

[求助] PCR，P出的条带在核酸胶孔跑不下来 已有1人参与

如图所示，是五个相似的质粒做的定点突变，P的全质粒，温度梯度。其中三个有不同程度的条带跑不下来的现象。
转化后，只有第一个转化不成功，因为其所有条带都不正常。
求指导，把第一个条带p出正常的条带。
1.突变的该位点，在his标签附近，GC含量较高，第一个GC含量60%，Melting temp: 75.1°C
2.有判断过是不是模板被蛋白污染的问题，但根据其他几个的对照分析，其他的不同温度就有不同的结果，感觉应该不是这个原因。PCR，P出的条带在核酸胶孔跑不下来
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    • 2017-04-25 20:50:49, 40.16 K

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1楼 2017-04-25 21:02:03
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sheng_1210

新虫 (小有名气)
我也是跑不出去孔，不知道什么原因

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2楼2017-04-25 23:17:11
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borrysa

金虫 (正式写手)
感觉是胶被gDNA污染了

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3楼2017-04-26 06:41:05
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你质粒P前有跑过吗？
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采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2017-04-26 08:01:16
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xiaohhh

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 781055707 at 2017-04-26 08:01:16
你质粒P前有跑过吗？

有跑过，没有在胶孔跑不下来的情况
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5楼2017-04-26 08:41:02
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xiaohhh

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by borrysa at 2017-04-26 06:41:05
感觉是胶被gDNA污染了

胶被污染了？可是有的行，有的不行啊
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6楼2017-04-26 08:42:22
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安群星

新虫 (初入文坛)
楼主，请问你扩增的全质粒有多大呢，用的什么酶？我最近也在扩增全质粒，大小6500bp左右，几次尝试都没有成功，请求帮助

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7楼2017-04-26 08:57:38
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xiaohhh

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 安群星 at 2017-04-26 08:57:38
楼主，请问你扩增的全质粒有多大呢，用的什么酶？我最近也在扩增全质粒，大小6500bp左右，几次尝试都没有成功，请求帮助

我的质粒大小和你差不了太多，酶是诺唯赞的phanta，还有primerstar，高保真的
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8楼2017-04-26 09:05:39
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