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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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Mix-T

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] cDNA中PCR出DNA中没有的片段? 已有3人参与

我用同一个物种的cDNA和DNA扩增同一个基因,但是有时会出现一段序列在DNA上没有,cDNA中扩增到了。应该不会是模板污染,cDNA和DNA都是分开时间提的,试了好几次都有这种情况,想咨询一下,会有这种情况么?
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宁文峰

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-23 22:45:43
考虑一下引物和内含子的相对位置,还有就是特异性

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所追求的不在明天,而在现在以前
2楼2017-04-22 22:43:28
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路在脚下1011

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

3楼2017-04-22 22:44:40
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Mix-T

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
3楼: Originally posted by 路在脚下1011 at 2017-04-22 22:44:40
也许是病毒的基因

不是呢,可能是个花色相关基因
4楼2017-04-23 16:30:27
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Mix-T

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
2楼: Originally posted by 宁文峰 at 2017-04-22 22:43:28
考虑一下引物和内含子的相对位置,还有就是特异性

扩出的基因的确是我要的基因,但就是cDNA PCR老多出一段让我很费解
5楼2017-04-23 16:31:57
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宁文峰

专家顾问

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Mix-T: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢,我后来发现我的样品可能有问题,因为不同花色的结果一致了,但基因组仍存在差别。我现在重新验证一下 2017-05-09 15:10:44
引用回帖:
5楼: Originally posted by Mix-T at 2017-04-23 16:31:57
扩出的基因的确是我要的基因,但就是cDNA PCR老多出一段让我很费解...

如果你通过测序可以确定你的pcr产物序列没有问题(有内含子的dna比没有内含子的rna扩增小),并且pcr本身没问题,,那就要考虑1.数据库中的数据是否有问题,包括检索问题和序列本身问题2.因为花本身就是一个很复杂的器官,查一些相关的文献,看看花色基因调控相关问题3.多次重复实验,只有每一次结果一致,才能排除操作错误,才有继续探讨的价值。。。仅供参考。。

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所追求的不在明天,而在现在以前
6楼2017-04-23 21:52:32
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exon2002

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR扩增出来的一定是有的片段。否则,创造性就大啦~~~
7楼2017-04-24 06:50:57
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xuweitao

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你看到的多余的序列有多长? 都是什么序列?
从逻辑上分析,这段序列应该来自转录之后的某个rna编辑事件。
rna editing有种类型就是插入。如Pan-editing,插入多个U,逆转录后显示为T。
8楼2017-04-24 09:10:37
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Mix-T

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
8楼: Originally posted by xuweitao at 2017-04-24 09:10:37
你看到的多余的序列有多长? 都是什么序列?
从逻辑上分析,这段序列应该来自转录之后的某个rna编辑事件。
rna editing有种类型就是插入。如Pan-editing,插入多个U,逆转录后显示为T。

后来发现是与另一个花色的基因序列一致了,但基因组上仍存在差别,因为基因组和cDNA不是同一批所以现在在怀疑样品问题,有后续了继续咨询,谢谢!
9楼2017-05-09 15:12:45
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