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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 实验技术 » PCR总是P不出来体条带，与DNA的浓度有什么关系吗？
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sheng_1210

新虫 (小有名气)

[求助] PCR总是P不出来体条带，与DNA的浓度有什么关系吗？ 已有1人参与

引物，退火温度都没有什么问题，最后确定是DNA的问题，稀释100倍后，测了OD260的值，请问这个数值应该在什么范围内才会不影响PCR呢？

@starseacow 发自小木虫IOS客户端
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sheng_1210

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1楼 2017-04-20 18:50:20
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srxh2013

新虫 (正式写手)
我以前也P不出来，后来查查查发现大鼠肝脏存放时间太久了，被降解了，提取的DNA就很少。

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5楼2017-04-21 08:09:58
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xrbcfghv

新虫 (初入文坛)
一般提取的dna浓度都是比较高的，不过应该不会影响pcr，但是如果别的因素都没有问题，那就可以试试调节dna浓度了，五百左右比较合适吧

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2楼2017-04-20 20:42:22
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sheng_1210

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xrbcfghv at 2017-04-20 20:42:22
一般提取的dna浓度都是比较高的，不过应该不会影响pcr，但是如果别的因素都没有问题，那就可以试试调节dna浓度了，五百左右比较合适吧

我之前就是怎么p都不出来结果，所以想到可能是DNA浓度的关系，但是你指的500是什么意思，纳克每微升吗？

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3楼2017-04-21 07:52:38
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xyutian999

新虫 (初入文坛)
我们20纳克都能跑出来啊

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4楼2017-04-21 08:09:34
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xyutian999

新虫 (初入文坛)
marker点2μl的量，跑出来3000bp的条带差不多就是23纳克，能看到很亮啊！

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6楼2017-04-21 08:10:45
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sheng_1210

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by srxh2013 at 2017-04-21 08:09:58
我以前也P不出来，后来查查查发现大鼠肝脏存放时间太久了，被降解了，提取的DNA就很少。

我这个是刚刚提的DNA，降解的可能性应该不是很大

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7楼2017-04-21 08:55:26
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sheng_1210

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xyutian999 at 2017-04-21 08:10:45
marker点2μl的量，跑出来3000bp的条带差不多就是23纳克，能看到很亮啊！

那我想我的大概浓度有点太大了，我昨天测了一下OD260的值，可能浓度太大了，我今天稀释一下再试试，我下面这个图里面浓度太大了吧
PCR总是P不出来体条带，与DNA的浓度有什么关系吗？



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8楼2017-04-21 08:58:24
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sheng_1210

新虫 (小有名气)
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9楼2017-04-21 15:57:37
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sheng_1210

新虫 (小有名气)
浓度都稀释了，为什么我的条带还是没有p出来呢？绝望

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10楼2017-04-21 15:58:30
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