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sheng_1210

新虫 (小有名气)

[求助] PCR总是P不出来体条带,与DNA的浓度有什么关系吗?已有1人参与

引物,退火温度都没有什么问题,最后确定是DNA的问题,稀释100倍后,测了OD260的值,请问这个数值应该在什么范围内才会不影响PCR呢?

@starseacow 发自小木虫IOS客户端
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srxh2013

新虫 (正式写手)

我以前也P不出来,后来查查查发现大鼠肝脏存放时间太久了,被降解了,提取的DNA就很少。

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5楼2017-04-21 08:09:58
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xrbcfghv

新虫 (初入文坛)

一般提取的dna浓度都是比较高的,不过应该不会影响pcr,但是如果别的因素都没有问题,那就可以试试调节dna浓度了,五百左右比较合适吧

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2楼2017-04-20 20:42:22
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sheng_1210

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xrbcfghv at 2017-04-20 20:42:22
一般提取的dna浓度都是比较高的,不过应该不会影响pcr,但是如果别的因素都没有问题,那就可以试试调节dna浓度了,五百左右比较合适吧

我之前就是怎么p都不出来结果,所以想到可能是DNA浓度的关系,但是你指的500是什么意思,纳克每微升吗?

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3楼2017-04-21 07:52:38
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xyutian999

新虫 (初入文坛)

4楼2017-04-21 08:09:34
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xyutian999

新虫 (初入文坛)

marker点2μl的量,跑出来3000bp的条带差不多就是23纳克,能看到很亮啊!

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6楼2017-04-21 08:10:45
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sheng_1210

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by srxh2013 at 2017-04-21 08:09:58
我以前也P不出来,后来查查查发现大鼠肝脏存放时间太久了,被降解了,提取的DNA就很少。

我这个是刚刚提的DNA,降解的可能性应该不是很大

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7楼2017-04-21 08:55:26
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sheng_1210

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by xyutian999 at 2017-04-21 08:10:45
marker点2μl的量,跑出来3000bp的条带差不多就是23纳克,能看到很亮啊!

那我想我的大概浓度有点太大了,我昨天测了一下OD260的值,可能浓度太大了,我今天稀释一下再试试,我下面这个图里面浓度太大了吧
PCR总是P不出来体条带,与DNA的浓度有什么关系吗?



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8楼2017-04-21 08:58:24
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sheng_1210

新虫 (小有名气)

送红花一朵
9楼2017-04-21 15:57:37
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sheng_1210

新虫 (小有名气)

浓度都稀释了,为什么我的条带还是没有p出来呢?绝望

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10楼2017-04-21 15:58:30
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