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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » PCR使用同一引物扩增基因组有条带，cDNA无条带
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修香恋

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR使用同一引物扩增基因组有条带，cDNA无条带 已有3人参与

因为需要做实时荧光定量PCR，所以先做普通PCR扩增cDNA,但是没有条带，降过温度也用过两步法，均无条带。但用这对引物扩增基因组DNA时，却能扩增出条带，这说明引物应该没问题啊，但是为什么cDNA无法扩增条带呢，求大神指点，万分感激！
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1楼 2017-04-20 17:08:54
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wenting9999

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
修香恋: 金币+5, ★有帮助 2017-05-04 09:34:51
PCR扩增；无怪乎模板、引物、反应条件（试剂、时间、温度）
从你不完整的叙述中可以判断的是cDNA 能扩增内参，说明cDNA没有问题；gDNA和cDNA使用同一种引物gDNA可以扩增，但cDNA
无扩增，不知道你的引物是怎样设计的。gDNA所含的是带有内含子和外显子的基因组基因，而从cDNA是从mRNA反转录来的，是已经过剪接、去除了内含子的cDNA，很有可能是引物设计在外含子上了。
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珍惜生命
8楼2017-04-21 09:01:51
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fendouzi

禁虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-21 07:45:29
本帖内容被屏蔽
4楼2017-04-20 23:53:53
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fendouzi

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
5楼2017-04-20 23:55:22
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普通回帖

修香恋

铜虫 (小有名气)
想补充一下，cDNA用内参基因扩过，也用于扩过其他基因，都可以扩增出条带，求解释啊求解释!
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2楼2017-04-20 17:13:44
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)
引物设计有问题？

发自小木虫Android客户端
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做一个阳光、开朗的小和尚
3楼2017-04-20 23:24:12
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修香恋

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2017-04-20 23:24:12
引物设计有问题？

引物应该是没有问题的，这是第二对引物了，依然扩增不出来
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6楼2017-04-21 08:35:39
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修香恋

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fendouzi at 2017-04-20 23:53:53
内参能扩出来，说明cDNA没有问题。基因组有带，又不一定cDNA就能扩出带，如果你的引物序列只一部分在cDNA上呢？就会出现扩不出来的情况

应该不是引物问题，因为换过引物
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7楼2017-04-21 08:35:55
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修香恋

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wenting9999 at 2017-04-21 09:01:51
PCR扩增；无怪乎模板、引物、反应条件（试剂、时间、温度）
从你不完整的叙述中可以判断的是cDNA 能扩增内参，说明cDNA没有问题；gDNA和cDNA使用同一种引物gDNA可以扩增，但cDNA
无扩增，不知道你的引物是怎样设计 ...

引物是根据cDNA序列设计的，不是根据基因组DNA设计的，这样也有可能设在内含子上吗？求解答啊，谢谢！
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9楼2017-04-21 11:07:37
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你太善良

新虫 (著名写手)
序列哪里来的cdna扩不出来也正常，可能表达量太低。也有可cdna质量太差，找个常用的基因先扩一下，检查下质量怎么样。

发自小木虫IOS客户端
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10楼2017-04-21 12:16:29
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