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bestzdz

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
修香恋: 金币+5 2017-05-04 09:35:10
首先要排除cDNA的质量问题,不光用内参,也要用别的引物试验cDNA样本,看能否正常扩增。如果cDNA没问题,要跑胶看看用基因组DNA扩增的片段大小和你的目的片段是否一致,很有可能是你的引物没设计好,没法扩增出目的片段,在用基因组扩增的时候产生的是非特异扩增。
学海无涯,乐在其中;谨言慎行,惜时自勉!
11楼2017-04-21 13:35:22
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宁文峰

新虫 (小有名气)

你的引物不会落在内含子上了吧

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所追求的不在明天,而在现在以前
12楼2017-04-24 20:12:40
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宁文峰

新虫 (小有名气)

或者rna存在高级结构,,导致你压根就没反转录出来

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所追求的不在明天,而在现在以前
13楼2017-04-24 20:13:41
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修香恋

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by bestzdz at 2017-04-21 13:35:22
首先要排除cDNA的质量问题,不光用内参,也要用别的引物试验cDNA样本,看能否正常扩增。如果cDNA没问题,要跑胶看看用基因组DNA扩增的片段大小和你的目的片段是否一致,很有可能是你的引物没设计好,没法扩增出目的 ...

用基因组扩增的时候条带与目的片段大小一致,应该不是非特异
14楼2017-04-26 08:26:28
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修香恋

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 宁文峰 at 2017-04-24 20:12:40
你的引物不会落在内含子上了吧

没有
15楼2017-04-26 08:26:52
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修香恋

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 你太善良 at 2017-04-21 12:16:29
序列哪里来的cdna扩不出来也正常,可能表达量太低。也有可cdna质量太差,找个常用的基因先扩一下,检查下质量怎么样。

好的 谢谢
16楼2017-04-26 08:28:06
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bestzdz

金虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 修香恋 at 2017-04-26 09:26:28
用基因组扩增的时候条带与目的片段大小一致,应该不是非特异...

大小一致也不能完全排除非特异扩增,可以测序确认一下
学海无涯,乐在其中;谨言慎行,惜时自勉!
17楼2017-04-26 08:42:52
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修香恋

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 宁文峰 at 2017-04-24 20:13:41
或者rna存在高级结构,,导致你压根就没反转录出来

这个是说我部分基因可以扩增出来,但某个特定基因无法扩增?
18楼2017-04-26 10:59:15
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yanbodr

至尊木虫 (文坛精英)

如果引物设计没问题的话,还可以注意一下该基因的表达特异性

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19楼2018-06-12 20:14:56
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匿名

用户注销 (著名写手)

本帖仅楼主可见
20楼2018-11-28 21:55:15
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