应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 枯草芽孢杆菌芽孢基因Spo0A及上下游序列（3200bp）的测定问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1345  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

我是VV07072

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 枯草芽孢杆菌芽孢基因Spo0A及上下游序列（3200bp）的测定问题 已有1人参与

枯草芽孢杆菌是我自己筛选的，没有做全基因测序。现在我要对这个菌做芽孢基因的敲除，因此我需要先得到这个菌的Spo0A及上下游序列（用来构建敲除载体），再来设计引物。所以，我先参照别人论文中的引物以及PCR条件进行，但是一直PCR不出我要的片段。已经确定提取出来了总DNA，现在应该如何进行下去？求帮助！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-04-19 17:12:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaozhibozhi

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-20 07:44:35
测个全基因组吧，便宜实惠。小片段文库+hiseq测1G数据1000元就ok了。当然你也可以选择扩侧翼序列，有许多方法，工作量大，花费也不低

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
做一个阳光、开朗的小和尚
2楼2017-04-20 00:23:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuweitao

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
我是VV07072: 金币+10, ★★★很有帮助 2017-04-22 11:19:54
附件里是枯草芽孢杆菌168在该基因附近的序列。

因为你的菌可能和它的区别较大，你可以根据该基因内部（或上下游基因）的序列保守区域设计引物（可能需要简并引物）来做pcr扩增并测序。

当然楼上说的全基因组测序自然是个选择，有这个预算的话就做吧，估计迟早会在关于这个菌的其他性质上用到，一劳永逸了。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : sequence.gb
    • 2017-04-20 16:03:09, 28.71 K
3楼2017-04-20 16:07:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我是VV07072

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
3楼: Originally posted by xuweitao at 2017-04-20 16:07:14
附件里是枯草芽孢杆菌168在该基因附近的序列。

因为你的菌可能和它的区别较大，你可以根据该基因内部（或上下游基因）的序列保守区域设计引物（可能需要简并引物）来做pcr扩增并测序。

当然楼上说的全基因组测 ...

尴尬的是，老板觉得没必要做全基因组测序。谢谢你的建议！更尴尬的是，实验室没有人做分子学实验，所以我没法请教我设计的引物是否合适
赞一下 回复此楼
4楼2017-04-22 11:17:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我是VV07072

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2017-04-20 00:23:58
测个全基因组吧，便宜实惠。小片段文库+hiseq测1G数据1000元就ok了。当然你也可以选择扩侧翼序列，有许多方法，工作量大，花费也不低

我目前已经将菌寄到生工，并提供我参考别人论文中的引物，让他们帮我进行PCR和测序，至于全基因测序，老板并不打算做。谢谢你！
赞一下 回复此楼
5楼2017-04-22 11:19:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 我是VV07072 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿厦门大学化学工程（专硕）-数二英二406分-求调剂 +3 厦大化工 2026-04-01 3/150 2026-04-01 15:16 by 544594351
[考研] 一志愿武汉理工，总分321，英一数二，求老师收留。 +13 nnnnnnn5 2026-03-25 13/650 2026-04-01 14:51 by ningjing2014
[考研] 一志愿郑大085600，310分求调剂 +6 李潇可 2026-03-26 6/300 2026-04-01 14:44 by chenqifeng666
[考研] 考研调剂 +11 Amber00 2026-03-31 11/550 2026-04-01 11:32 by wangjy2002
[考研] 生物学296求调剂 +10 汤圆包 2026-03-29 14/700 2026-04-01 10:44 by 求调剂zz
[考研] 一志愿武理材料工程302调剂环化或化工 +15 Doleres 2026-03-31 16/800 2026-04-01 09:49 by lfj11
[考研] 土木304求调剂 +3 兔突突突， 2026-03-31 3/150 2026-04-01 09:42 by JourneyLucky
[考研] 化学308分调剂 +11 你好明天你好 2026-03-30 12/600 2026-03-31 19:14 by 杨金金金
[考研] 生物考研337分求调剂 +4 cgxin 2026-03-30 6/300 2026-03-31 14:18 by 记事本2026
[考研] 272求调剂，接受跨专业调剂！ +3 闲鱼卢 2026-03-31 3/150 2026-03-31 13:00 by 替代品000
[考研] 293分求调剂，外语为俄语 +5 加一一九 2026-03-31 5/250 2026-03-31 09:39 by zhshch
[考研] 调剂 +4 GK72 2026-03-30 4/200 2026-03-30 20:32 by dick_runner
[考研] 一志愿厦门大学材料工程专硕354找调剂！！！ +5 贝呗钡钡 2026-03-30 5/250 2026-03-30 18:16 by 无际的草原
[考研] 071010 323 分求调剂 +3 Baekzhy 2026-03-27 3/150 2026-03-30 14:24 by andresqi
[考研] 085701求调剂初试286分 +5 secret0328 2026-03-28 5/250 2026-03-30 12:54 by fangnagu
[考研] 数一英一271专硕（085401）求调剂，可跨 +7 前行必有光 2026-03-28 8/400 2026-03-28 23:22 by 小木虫tim
[考研] 一志愿厦门大学化学学硕307求调剂 +10 y7czhao 2026-03-26 10/500 2026-03-28 14:23 by 唐沐儿
[考研] 275求调剂 +10 jjjjjjjjjjl 2026-03-27 10/500 2026-03-27 23:47 by barnett0632
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕，求调剂 +5 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 8/400 2026-03-27 19:22 by 丶风雪夜归人丶
[论文投稿] Journal of Mechanical Science and Technology +3 Russ_ss 2026-03-25 5/250 2026-03-27 10:49 by 陆小果画大饼
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭