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枯草芽孢杆菌芽孢基因Spo0A及上下游序列（3200bp）的测定问题 已有1人参与
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| 枯草芽孢杆菌是我自己筛选的，没有做全基因测序。现在我要对这个菌做芽孢基因的敲除，因此我需要先得到这个菌的Spo0A及上下游序列（用来构建敲除载体），再来设计引物。所以，我先参照别人论文中的引物以及PCR条件进行，但是一直PCR不出我要的片段。已经确定提取出来了总DNA，现在应该如何进行下去？求帮助！ |
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xuweitao
铁杆木虫 (著名写手)
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
我是VV07072: 金币+10, ★★★很有帮助 2017-04-22 11:19:54
感谢参与，应助指数 +1
我是VV07072: 金币+10, ★★★很有帮助 2017-04-22 11:19:54
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附件里是枯草芽孢杆菌168在该基因附近的序列。 因为你的菌可能和它的区别较大，你可以根据该基因内部（或上下游基因）的序列保守区域设计引物（可能需要简并引物）来做pcr扩增并测序。 当然楼上说的全基因组测序自然是个选择，有这个预算的话就做吧，估计迟早会在关于这个菌的其他性质上用到，一劳永逸了。 |
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2017-04-20 16:03:09, 28.71 K
3楼2017-04-20 16:07:14
zhaozhibozhi
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-20 07:44:35
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-20 07:44:35
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测个全基因组吧，便宜实惠。小片段文库+hiseq测1G数据1000元就ok了。当然你也可以选择扩侧翼序列，有许多方法，工作量大，花费也不低 发自小木虫Android客户端 |
2楼2017-04-20 00:23:58
4楼2017-04-22 11:17:16
5楼2017-04-22 11:19:21
