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upwardkl新虫 (初入文坛)
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[求助]
诱导表达的蛋白主要在包涵体中，已带有GST标签，求助分离纯化的操作方法？ 已有1人参与
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求助: 诱导原核表达，进行SDS-PAGE检测，主要以包涵体的形式出现，查询得知有超滤、透析等方法，但不知道具体该如何操作？  购买了一个GST分离纯化的试剂盒，，，但说明书为英文版，，看得似懂非懂，，，不知如何下手？  望高手指点，谢谢你们！  |
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蓝蓝0921
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2楼2017-04-18 21:47:06
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5楼2017-04-19 19:50:08
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6楼2017-04-19 19:50:56
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超滤和透析都是后续工作，你首要任务让蛋白可溶，GST本来是为了让蛋白可溶的，要是加了GST还是包涵体，可以考虑更换培养基，用TB培养基可以提高可溶性，降低诱导剂浓度和诱导温度，可以拿到可溶的蛋白，不推荐进行包涵体复性，GST融合蛋白蛋白复性不成功不会挂柱，后续纯化仍然很麻烦 发自小木虫Android客户端 |
7楼2017-04-19 22:38:52
upwardkl
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8楼2017-04-20 20:26:09
小小细胞啊
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