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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 诱导表达的蛋白主要在包涵体中，已带有GST标签，求助分离纯化的操作方法？
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upwardkl

新虫 (初入文坛)

[求助] 诱导表达的蛋白主要在包涵体中，已带有GST标签，求助分离纯化的操作方法？ 已有1人参与

求助:
诱导原核表达，进行SDS-PAGE检测，主要以包涵体的形式出现，查询得知有超滤、透析等方法，但不知道具体该如何操作？
购买了一个GST分离纯化的试剂盒，，，但说明书为英文版，，看得似懂非懂，，，不知如何下手？

望高手指点，谢谢你们！
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upwardkl

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雪霁花开，向上追求
1楼 2017-04-18 21:42:14
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蓝蓝0921

铁杆木虫 (职业作家)
逐字逐句翻译→_→

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古怪
2楼2017-04-18 21:47:06
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Wawa521

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2017-04-18 21:48:58
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Hjqilu

新虫 (初入文坛)
换MBP载体吧

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4楼2017-04-19 00:16:24
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upwardkl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Wawa521 at 2017-04-18 21:48:58
我也是GST标签，表达后也是在包涵体，纯化了几次也纯化不出来，现在正在换载体

好吧，谢谢你！
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雪霁花开，向上追求
5楼2017-04-19 19:50:08
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upwardkl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Hjqilu at 2017-04-19 00:16:24
换MBP载体吧

请问你曾经使用过嘛？效果如何？
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雪霁花开，向上追求
6楼2017-04-19 19:50:56
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cxw123

新虫 (正式写手)
超滤和透析都是后续工作，你首要任务让蛋白可溶，GST本来是为了让蛋白可溶的，要是加了GST还是包涵体，可以考虑更换培养基，用TB培养基可以提高可溶性，降低诱导剂浓度和诱导温度，可以拿到可溶的蛋白，不推荐进行包涵体复性，GST融合蛋白蛋白复性不成功不会挂柱，后续纯化仍然很麻烦

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7楼2017-04-19 22:38:52
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upwardkl

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
好的，谢谢你的应助！
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雪霁花开，向上追求
8楼2017-04-20 20:26:09
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小小细胞啊

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by cxw123 at 2017-04-19 22:38:52
超滤和透析都是后续工作，你首要任务让蛋白可溶，GST本来是为了让蛋白可溶的，要是加了GST还是包涵体，可以考虑更换培养基，用TB培养基可以提高可溶性，降低诱导剂浓度和诱导温度，可以拿到可溶的蛋白，不推荐进行包 ...

如果包涵体纯度够高 是不是可以直接变性后使用 不用复性挂柱子

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9楼2017-05-02 20:49:23
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