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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » crispr编辑后的检测方法
汕头大学海洋科学接受调剂
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bigbei

新虫 (初入文坛)

[交流] crispr编辑后的检测方法

请问各位大神，对植物进行基因编辑后如何检测是否成功敲除？

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1楼 2017-04-17 23:58:40
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6_pengfei

铁虫 (小有名气)
★
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有检测试剂盒，比较方便。先设计引物扩增目的片段，和野生型杂交后酶切检测，能切开的送测，如果敲除碱基为非3的整数倍则为成功敲除的。详细可以问我。
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努力精修
2楼2017-04-20 15:15:07
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本田透1990

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一方面可以通过观察表型进行推测，另一方面可以利用特异性引物，对你的敲除位点进行扩增，然后送去测序，与WT序列进行比对，如果当时设计敲除的序列有特异性酶切位点可以扩增序列后直接酶切检测
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3楼2017-04-20 16:39:33
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soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党
★
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引用回帖:
3楼: Originally posted by 本田透1990 at 2017-04-20 16:39:33
一方面可以通过观察表型进行推测，另一方面可以利用特异性引物，对你的敲除位点进行扩增，然后送去测序，与WT序列进行比对，如果当时设计敲除的序列有特异性酶切位点可以扩增序列后直接酶切检测

基本就是楼上说的，表型检测和基因型检测。
编辑是否成功，通过基因型--PCR+测序，或者酶切
编辑是否有效，那就是通过表型了
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4楼2017-05-02 05:01:31
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bigbei

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 6_pengfei at 2017-04-20 15:15:07
有检测试剂盒，比较方便。先设计引物扩增目的片段，和野生型杂交后酶切检测，能切开的送测，如果敲除碱基为非3的整数倍则为成功敲除的。详细可以问我。

你说的是用T7E1酶切的那种方法吗

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5楼2017-05-05 00:03:03
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草溪河

铁虫 (著名写手)
★
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引用回帖:
5楼: Originally posted by bigbei at 2017-05-05 00:03:03
你说的是用T7E1酶切的那种方法吗
...

pcr产物测序方便便宜的话，可直接测序，不必用t7酶

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6楼2017-05-05 10:34:57
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bigbei

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 草溪河 at 2017-05-05 10:34:57
pcr产物测序方便便宜的话，可直接测序，不必用t7酶
...

那个试剂盒哪个公司有卖的啊

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7楼2017-05-05 15:48:49
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