应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » crispr编辑后的检测方法
51/1返回列表
查看: 2757  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

bigbei

新虫 (初入文坛)

[交流] crispr编辑后的检测方法

请问各位大神，对植物进行基因编辑后如何检测是否成功敲除？

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2017-04-17 23:58:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

本田透1990

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一方面可以通过观察表型进行推测，另一方面可以利用特异性引物，对你的敲除位点进行扩增，然后送去测序，与WT序列进行比对，如果当时设计敲除的序列有特异性酶切位点可以扩增序列后直接酶切检测
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2017-04-20 16:39:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

6_pengfei

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有检测试剂盒，比较方便。先设计引物扩增目的片段，和野生型杂交后酶切检测，能切开的送测，如果敲除碱基为非3的整数倍则为成功敲除的。详细可以问我。
赞一下(2人) 回复此楼
努力精修
2楼2017-04-20 15:15:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 本田透1990 at 2017-04-20 16:39:33
一方面可以通过观察表型进行推测，另一方面可以利用特异性引物，对你的敲除位点进行扩增，然后送去测序，与WT序列进行比对，如果当时设计敲除的序列有特异性酶切位点可以扩增序列后直接酶切检测

基本就是楼上说的，表型检测和基因型检测。
编辑是否成功，通过基因型--PCR+测序，或者酶切
编辑是否有效，那就是通过表型了
赞一下 回复此楼
4楼2017-05-02 05:01:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bigbei

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 6_pengfei at 2017-04-20 15:15:07
有检测试剂盒，比较方便。先设计引物扩增目的片段，和野生型杂交后酶切检测，能切开的送测，如果敲除碱基为非3的整数倍则为成功敲除的。详细可以问我。

你说的是用T7E1酶切的那种方法吗

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-05-05 00:03:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭