应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » WB一直做不出来求教大神啊！！！！！！！
161/2返回列表12下一页
查看: 2718  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xiao2189818

金虫 (正式写手)

[交流] WB一直做不出来求教大神啊！！！！！！！ 已有12人参与

求教各位大神
本人做WB好久   
一抗1：500 （2μl） TBST稀释 博士德β-actin  
二抗1：2000 （1μl）TBST稀释 三箭羊抗鼠

上胶80v 下胶120v   转膜40min 200mA
封闭1.5h
一抗过夜 洗三次
二抗2小时 洗三次

每次条件都一样而且我目的条带CYP450s都出来了，反而内参没有出来。很郁闷
大神看看我的条带
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 5s_1.tif
    • 2017-04-15 17:06:41, 353.67 K
  • 附件 2 : 5s_2.tif
    • 2017-04-15 17:06:41, 353.67 K
  • 附件 3 : 10s_1.tif
    • 2017-04-15 17:06:42, 353.67 K
  • 附件 4 : 10s_2.tif
    • 2017-04-15 17:06:43, 353.67 K
  • 附件 5 : 10s_3.tif
    • 2017-04-15 17:06:43, 353.67 K
  • 附件 6 : 15s_1.tif
    • 2017-04-15 17:06:44, 353.67 K
  • 附件 7 : 20s_1.tif
    • 2017-04-15 17:06:44, 353.67 K
  • 附件 8 : 15s_1.tif
    • 2017-04-15 17:06:56, 353.67 K
  • 附件 9 : 15s_2.tif
    • 2017-04-15 17:06:57, 353.67 K
  • 附件 10 : 15s_3.tif
    • 2017-04-15 17:06:58, 353.67 K
  • 附件 11 : 15s_4.tif
    • 2017-04-15 17:06:58, 353.67 K
  • 附件 12 : 20s_1.tif
    • 2017-04-15 17:06:59, 353.67 K
  • 附件 13 : 20s_2.tif
    • 2017-04-15 17:06:59, 353.67 K
  • 附件 14 : 20s_3.tif
    • 2017-04-15 17:07:00, 353.67 K
  • 附件 15 : 20s_4.tif
    • 2017-04-15 17:07:01, 353.67 K
  • 附件 16 : 20s_5.tif
    • 2017-04-15 17:07:01, 353.67 K
  • 附件 17 : 25s_1.tif
    • 2017-04-15 17:07:01, 353.67 K
  • 附件 18 : 25s_2.tif
    • 2017-04-15 17:07:02, 353.67 K
  • 附件 19 : 5s_1.tif
    • 2017-04-15 17:07:07, 353.67 K
  • 附件 20 : 10s_1.tif
    • 2017-04-15 17:07:08, 353.67 K
  • 附件 21 : 15s_1.tif
    • 2017-04-15 17:07:08, 353.67 K
  • 附件 22 : 20s_1.tif
    • 2017-04-15 17:07:09, 353.67 K
  • 附件 23 : 20s_2.tif
    • 2017-04-15 17:07:09, 353.67 K
  • 附件 24 : 25s_1.tif
    • 2017-04-15 17:07:10, 353.67 K
  • 附件 25 : 25s_2.tif
    • 2017-04-15 17:07:10, 353.67 K

» 猜你喜欢
1楼 2017-04-15 17:08:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

鲨鱼999

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我是刚进实验室，跟内参一直有仇，但是CST的βactin，一抗1:2000，二抗1:4000，恒压100v转45~分钟1小时都可以出来，之前用锐抗的就不行，你可以换个公司的试试

发自小木虫Android客户端
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2017-04-17 15:19:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖仅楼主可见
赞一下
2楼2017-04-15 22:50:56
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

四季豆豆

银虫 (正式写手)
我们转膜是35v，60min。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2017-04-15 23:14:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxw123

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
换个抗体吧，不过博士德的抗体质量本人不敢苟同，听过很多内幕

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2017-04-15 23:17:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiao2189818

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by linyingjia at 2017-04-16 10:24:17
抗体不好使吧

才买回来的 我感觉是不是TBST洗三次把抗体洗掉了
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2017-04-17 10:53:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cnj123

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一抗浓度提高到1：200试试，actin的分子量并不高，45分钟可以。建议换一抗，我用的CST公司的。

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
连自己都不相信自己可以拥有，那就注定得不到。
9楼2017-04-17 10:59:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

宁文峰

新虫 (小有名气)
转膜时间和蛋白大小有关，看看文献就都有了。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
所追求的不在明天，而在现在以前
11楼2017-04-17 22:52:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

彼岸花开开花

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以考虑换换内参的抗体，实验技术方面基本问题都不大
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2017-04-18 10:33:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
抗体不好使吧

发自小木虫Android客户端
回复此楼
5楼2017-04-16 10:24:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvxiaobu0907

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
转膜时间少了吧，湿转还是干转

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
世事不难，吾辈何用
6楼2017-04-16 17:22:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiao2189818

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lvxiaobu0907 at 2017-04-16 17:22:19
转膜时间少了吧，湿转还是干转

湿转 但是转完膜看到的marker传上去的特别鲜艳
赞一下 回复此楼
7楼2017-04-17 10:02:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiao2189818 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 考研化学308分求调剂 +5 你好明天你好 2026-03-23 6/300 2026-03-23 11:02 by 素颜倾城1988
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 3/150 2026-03-23 10:32 by Iveryant
[考研] 石河子大学（211、双一流）硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 环境学硕288求调剂 +6 皮皮皮123456 2026-03-22 6/300 2026-03-22 16:52 by i_cooler
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +5 holy J 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:42 by Catalysis25
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 299求调剂 +4 某某某某位 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:30 by barlinike
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +14 chaojifeixia 2026-03-19 15/750 2026-03-21 13:24 by zhukairuo
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭