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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » WB一直做不出来求教大神啊！！！！！！！
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xiao2189818

金虫 (正式写手)

[交流] WB一直做不出来求教大神啊！！！！！！！ 已有12人参与

求教各位大神
本人做WB好久   
一抗1：500 （2μl） TBST稀释 博士德β-actin  
二抗1：2000 （1μl）TBST稀释 三箭羊抗鼠

上胶80v 下胶120v   转膜40min 200mA
封闭1.5h
一抗过夜 洗三次
二抗2小时 洗三次

每次条件都一样而且我目的条带CYP450s都出来了，反而内参没有出来。很郁闷
大神看看我的条带
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1楼 2017-04-15 17:08:02
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

鲨鱼999

木虫 (小有名气)
★
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我是刚进实验室，跟内参一直有仇，但是CST的βactin，一抗1:2000，二抗1:4000，恒压100v转45~分钟1小时都可以出来，之前用锐抗的就不行，你可以换个公司的试试

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10楼2017-04-17 15:19:15
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匿名

用户注销 (著名写手)
★
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2楼2017-04-15 22:50:56
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四季豆豆

银虫 (正式写手)
我们转膜是35v，60min。

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3楼2017-04-15 23:14:02
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cxw123

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
换个抗体吧，不过博士德的抗体质量本人不敢苟同，听过很多内幕

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4楼2017-04-15 23:17:16
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xiao2189818

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by linyingjia at 2017-04-16 10:24:17
抗体不好使吧

才买回来的 我感觉是不是TBST洗三次把抗体洗掉了
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8楼2017-04-17 10:53:11
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cnj123

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一抗浓度提高到1：200试试，actin的分子量并不高，45分钟可以。建议换一抗，我用的CST公司的。

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连自己都不相信自己可以拥有，那就注定得不到。
9楼2017-04-17 10:59:23
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宁文峰

新虫 (小有名气)
转膜时间和蛋白大小有关，看看文献就都有了。

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所追求的不在明天，而在现在以前
11楼2017-04-17 22:52:16
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彼岸花开开花

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以考虑换换内参的抗体，实验技术方面基本问题都不大
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12楼2017-04-18 10:33:53
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普通回帖

linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
抗体不好使吧

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5楼2017-04-16 10:24:17
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lvxiaobu0907

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
转膜时间少了吧，湿转还是干转

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世事不难，吾辈何用
6楼2017-04-16 17:22:19
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xiao2189818

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lvxiaobu0907 at 2017-04-16 17:22:19
转膜时间少了吧，湿转还是干转

湿转 但是转完膜看到的marker传上去的特别鲜艳
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7楼2017-04-17 10:02:27
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