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xiao2189818

金虫 (正式写手)

[交流] WB一直做不出来求教大神啊!!!!!!!已有12人参与

求教各位大神
本人做WB好久   
一抗1:500 (2μl) TBST稀释 博士德β-actin  
二抗1:2000 (1μl)TBST稀释 三箭羊抗鼠

上胶80v 下胶120v   转膜40min 200mA
封闭1.5h
一抗过夜 洗三次
二抗2小时 洗三次

每次条件都一样而且我目的条带CYP450s都出来了,反而内参没有出来。很郁闷
大神看看我的条带
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鲨鱼999

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我是刚进实验室,跟内参一直有仇,但是CST的βactin,一抗1:2000,二抗1:4000,恒压100v转45~分钟1小时都可以出来,之前用锐抗的就不行,你可以换个公司的试试

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10楼2017-04-17 15:19:15
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匿名

用户注销 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖仅楼主可见
2楼2017-04-15 22:50:56
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四季豆豆

银虫 (正式写手)

3楼2017-04-15 23:14:02
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cxw123

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
换个抗体吧,不过博士德的抗体质量本人不敢苟同,听过很多内幕

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4楼2017-04-15 23:17:16
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xiao2189818

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by linyingjia at 2017-04-16 10:24:17
抗体不好使吧

才买回来的 我感觉是不是TBST洗三次把抗体洗掉了
8楼2017-04-17 10:53:11
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cnj123

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
一抗浓度提高到1:200试试,actin的分子量并不高,45分钟可以。建议换一抗,我用的CST公司的。

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连自己都不相信自己可以拥有,那就注定得不到。
9楼2017-04-17 10:59:23
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宁文峰

新虫 (小有名气)

转膜时间和蛋白大小有关,看看文献就都有了。

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所追求的不在明天,而在现在以前
11楼2017-04-17 22:52:16
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彼岸花开开花

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以考虑换换内参的抗体,实验技术方面基本问题都不大
12楼2017-04-18 10:33:53
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普通回帖

linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

5楼2017-04-16 10:24:17
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lvxiaobu0907

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
转膜时间少了吧,湿转还是干转

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世事不难,吾辈何用
6楼2017-04-16 17:22:19
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xiao2189818

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by lvxiaobu0907 at 2017-04-16 17:22:19
转膜时间少了吧,湿转还是干转

湿转 但是转完膜看到的marker传上去的特别鲜艳
7楼2017-04-17 10:02:27
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