应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » WB一直做不出来求教大神啊！！！！！！！
161/2返回列表12下一页
查看: 2890  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xiao2189818

金虫 (正式写手)

[交流] WB一直做不出来求教大神啊！！！！！！！ 已有12人参与

求教各位大神
本人做WB好久   
一抗1：500 （2μl） TBST稀释 博士德β-actin  
二抗1：2000 （1μl）TBST稀释 三箭羊抗鼠

上胶80v 下胶120v   转膜40min 200mA
封闭1.5h
一抗过夜 洗三次
二抗2小时 洗三次

每次条件都一样而且我目的条带CYP450s都出来了，反而内参没有出来。很郁闷
大神看看我的条带
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 5s_1.tif
    • 2017-04-15 17:06:41, 353.67 K
  • 附件 2 : 5s_2.tif
    • 2017-04-15 17:06:41, 353.67 K
  • 附件 3 : 10s_1.tif
    • 2017-04-15 17:06:42, 353.67 K
  • 附件 4 : 10s_2.tif
    • 2017-04-15 17:06:43, 353.67 K
  • 附件 5 : 10s_3.tif
    • 2017-04-15 17:06:43, 353.67 K
  • 附件 6 : 15s_1.tif
    • 2017-04-15 17:06:44, 353.67 K
  • 附件 7 : 20s_1.tif
    • 2017-04-15 17:06:44, 353.67 K
  • 附件 8 : 15s_1.tif
    • 2017-04-15 17:06:56, 353.67 K
  • 附件 9 : 15s_2.tif
    • 2017-04-15 17:06:57, 353.67 K
  • 附件 10 : 15s_3.tif
    • 2017-04-15 17:06:58, 353.67 K
  • 附件 11 : 15s_4.tif
    • 2017-04-15 17:06:58, 353.67 K
  • 附件 12 : 20s_1.tif
    • 2017-04-15 17:06:59, 353.67 K
  • 附件 13 : 20s_2.tif
    • 2017-04-15 17:06:59, 353.67 K
  • 附件 14 : 20s_3.tif
    • 2017-04-15 17:07:00, 353.67 K
  • 附件 15 : 20s_4.tif
    • 2017-04-15 17:07:01, 353.67 K
  • 附件 16 : 20s_5.tif
    • 2017-04-15 17:07:01, 353.67 K
  • 附件 17 : 25s_1.tif
    • 2017-04-15 17:07:01, 353.67 K
  • 附件 18 : 25s_2.tif
    • 2017-04-15 17:07:02, 353.67 K
  • 附件 19 : 5s_1.tif
    • 2017-04-15 17:07:07, 353.67 K
  • 附件 20 : 10s_1.tif
    • 2017-04-15 17:07:08, 353.67 K
  • 附件 21 : 15s_1.tif
    • 2017-04-15 17:07:08, 353.67 K
  • 附件 22 : 20s_1.tif
    • 2017-04-15 17:07:09, 353.67 K
  • 附件 23 : 20s_2.tif
    • 2017-04-15 17:07:09, 353.67 K
  • 附件 24 : 25s_1.tif
    • 2017-04-15 17:07:10, 353.67 K
  • 附件 25 : 25s_2.tif
    • 2017-04-15 17:07:10, 353.67 K

» 猜你喜欢
1楼 2017-04-15 17:08:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

鲨鱼999

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我是刚进实验室，跟内参一直有仇，但是CST的βactin，一抗1:2000，二抗1:4000，恒压100v转45~分钟1小时都可以出来，之前用锐抗的就不行，你可以换个公司的试试

发自小木虫Android客户端
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2017-04-17 15:19:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖仅楼主可见
赞一下
2楼2017-04-15 22:50:56
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

四季豆豆

银虫 (正式写手)
我们转膜是35v，60min。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2017-04-15 23:14:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxw123

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
换个抗体吧，不过博士德的抗体质量本人不敢苟同，听过很多内幕

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2017-04-15 23:17:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiao2189818

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by linyingjia at 2017-04-16 10:24:17
抗体不好使吧

才买回来的 我感觉是不是TBST洗三次把抗体洗掉了
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2017-04-17 10:53:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cnj123

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一抗浓度提高到1：200试试，actin的分子量并不高，45分钟可以。建议换一抗，我用的CST公司的。

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
连自己都不相信自己可以拥有，那就注定得不到。
9楼2017-04-17 10:59:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

宁文峰

新虫 (小有名气)
转膜时间和蛋白大小有关，看看文献就都有了。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
所追求的不在明天，而在现在以前
11楼2017-04-17 22:52:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

彼岸花开开花

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以考虑换换内参的抗体，实验技术方面基本问题都不大
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2017-04-18 10:33:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
抗体不好使吧

发自小木虫Android客户端
回复此楼
5楼2017-04-16 10:24:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvxiaobu0907

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
转膜时间少了吧，湿转还是干转

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
世事不难，吾辈何用
6楼2017-04-16 17:22:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiao2189818

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lvxiaobu0907 at 2017-04-16 17:22:19
转膜时间少了吧，湿转还是干转

湿转 但是转完膜看到的marker传上去的特别鲜艳
赞一下 回复此楼
7楼2017-04-17 10:02:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiao2189818 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 8/400 2026-08-23 14:30 by KM5EcsNQRBPn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 6/300 2026-08-23 14:21 by KM5EcsNQRBPn
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +3 process2012 2026-08-23 4/200 2026-08-23 12:54 by huixian257
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 什么时候开奖？ +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 04:04 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:43 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭