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好晓峰

新虫 (初入文坛)

[求助] 聚丙烯酰胺凝胶电泳染色问题,有图 已有3人参与

本科毕业实验,由于是第一次做,结果不行但是找不到问题所在,求各路大神解答
    变性加样缓冲液: 0.5%溴酚蓝,98%去离子甲酰胺,2%甘油,10mM EDTA
    聚丙烯酰胺凝胶染色:固定液:10%无水乙醇 ;氧化液:1%硝酸;染色液:0.2%硝酸银(500ml+200ul甲醛);显色液:3%碳酸钠(500ml+100ul甲醛+100ul硫代硫酸钠)

    电泳时间200V 3.5h;

    不知道是不是电泳时间不够,但我看溴酚蓝都快要到底了才取出来的。marker都跑出来了,其他的看不清楚。

聚丙烯酰胺凝胶电泳染色问题,有图
IMG_20170414_155520.jpg


聚丙烯酰胺凝胶电泳染色问题,有图-1
IMG_20170414_155552.jpg
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的protocol不行,换一个。
2楼2017-04-17 10:32:42
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好晓峰

新虫 (初入文坛)

在把电流从50mA提升到100mA后,同样的时间出了这张图。是不是还可以把电流稍稍增大,或是时间再延长一些?
聚丙烯酰胺凝胶电泳染色问题,有图-2
IMG_20170417_161526.jpg

3楼2017-04-17 20:49:43
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mlxmiao

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不用固定,用0.1%的硝酸银染色10分钟,然后用1%的氢氧化钠加1%的甲醛显色试下,

发自小木虫Android客户端
4楼2017-04-17 21:37:29
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mlxmiao

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

我的是6%的胶,170V电泳1.5-2个小时

发自小木虫Android客户端
5楼2017-04-17 21:39:16
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