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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求问我这个引物行么？
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病原新手

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求问我这个引物行么？ 已有2人参与

ITSF   TGC TTG GGA TTG GGG ATT GT
ITSR   GCA CTA ATA CAC TAA CGC CG
TM值分别57和53.5   GC%都是50。但是我就是扩不出条带，但是偶尔有，我退火时间60s延伸90 s。用的12.5ul的体系也做过不同模板量的梯度实验，但是就是没条带。引物二聚体很亮

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1楼 2017-04-13 14:53:03
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

y雨tak

新虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-14 07:47:46
F引物最好不要用AT结尾 用GC结尾

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3楼2017-04-14 00:43:26
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普通回帖

飞翔的吉大人

新虫 (初入文坛)
退火温度多少，什么条件

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2楼2017-04-13 15:35:56
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stabilized

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做个温度梯度试试吧
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坚持！
4楼2017-04-14 09:07:14
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

50%GC的Tm只有53，太假了吧
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5楼2017-04-17 10:23:40
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病原新手

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞翔的吉大人 at 2017-04-13 15:35:56
退火温度多少，什么条件

退火温度60度啊，退火60S  72度延伸 90S
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6楼2017-04-27 21:04:34
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病原新手

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by y雨tak at 2017-04-14 00:43:26
F引物最好不要用AT结尾 用GC结尾

哦哦 ，有的有条带有的没有，是因为这个原因么 ？ GC结尾有什么优点么？ 谢谢
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7楼2017-04-27 21:05:44
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病原新手

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by stabilized at 2017-04-14 09:07:14
做个温度梯度试试吧

做了啊， 有时候有有时候还是没有的。55到60都有条带，但是重复做就不好，条带很淡
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8楼2017-04-27 21:07:02
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病原新手

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-04-17 10:23:40
50%GC的Tm只有53，太假了吧

？？哪里假啊，引物合成回来的单子上，就是这样的啊
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9楼2017-04-27 21:07:39
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流水青苔

木虫 (著名写手)
后面是不是有五个碱基可以结合

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10楼2017-04-27 21:40:46
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