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病原新手

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求问我这个引物行么? 已有2人参与

ITSF   TGC TTG GGA TTG GGG ATT GT
ITSR   GCA CTA ATA CAC TAA CGC CG
TM值分别57和53.5   GC%都是50。但是我就是扩不出条带,但是偶尔有,我退火时间60s延伸90 s。用的12.5ul的体系也做过不同模板量的梯度实验,但是就是没条带。引物二聚体很亮

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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

y雨tak

新虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-14 07:47:46
F引物最好不要用AT结尾 用GC结尾

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3楼2017-04-14 00:43:26
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普通回帖

飞翔的吉大人

新虫 (初入文坛)

退火温度多少,什么条件

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2楼2017-04-13 15:35:56
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stabilized

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做个温度梯度试试吧
坚持!
4楼2017-04-14 09:07:14
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

50%GC的Tm只有53,太假了吧
5楼2017-04-17 10:23:40
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病原新手

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞翔的吉大人 at 2017-04-13 15:35:56
退火温度多少,什么条件

退火温度60度啊,退火60S  72度延伸 90S
6楼2017-04-27 21:04:34
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病原新手

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by y雨tak at 2017-04-14 00:43:26
F引物最好不要用AT结尾 用GC结尾

哦哦 ,有的有条带有的没有,是因为这个原因么 ? GC结尾有什么优点么? 谢谢
7楼2017-04-27 21:05:44
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病原新手

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by stabilized at 2017-04-14 09:07:14
做个温度梯度试试吧

做了啊, 有时候有有时候还是没有的。55到60都有条带,但是重复做就不好,条带很淡
8楼2017-04-27 21:07:02
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病原新手

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-04-17 10:23:40
50%GC的Tm只有53,太假了吧

??哪里假啊,引物合成回来的单子上,就是这样的啊
9楼2017-04-27 21:07:39
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流水青苔

木虫 (著名写手)

后面是不是有五个碱基可以结合

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10楼2017-04-27 21:40:46
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