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幸福滚滚

新虫 (初入文坛)

[求助] 镍柱纯化洗脱

样品在-20℃冻存了三天,之后用含20mM咪唑的平衡液重悬
超声破碎,工作3秒,间歇7秒。每轮99次,三轮
离心取上清
过柱:
上样前,20mM咪唑平衡,
上样,
上样后,20mM咪唑平衡液淋洗至基线
各梯度浓度的洗脱液洗脱

问题就出现在这,什么也没洗脱下来,500mM咪唑洗脱也是什么都没有,始终在基线位置,这是发生了什么?
另外,我用的是GE 1ml预装柱,是不是柱子选的太小了?
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星星,你好

新虫 (正式写手)

你可以取样跑蛋白胶,取超声后的上清及沉淀和过柱子后流出液,如果都没有说明蛋白没有表达,只有沉淀里有说明蛋白形成包涵体了,上清和流出液里都有说明蛋白没被挂住。

发自小木虫Android客户端
2楼2017-04-10 22:01:01
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