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苦B小书僧

新虫 (初入文坛)

[求助] 定点突变全质粒扩增，引物设计没问题，扩增不出来目的条带 已有3人参与

最近开始做定点突变，采用的全质粒扩增方法，但是一直没能扩增到目的条带，或者目的条带非常淡，请假下大家有没有遇到类似情况？有哪些可能原因导致这种情况啊？最终是怎么解决的？

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1楼 2017-04-07 10:46:55
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werq63

金虫 (著名写手)
如果质粒太大，还是不建议扩增整个质粒

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2楼2017-04-12 22:21:59
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werq63

金虫 (著名写手)
可以选一些比较好用的酶切位点设计两对引物

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3楼2017-04-12 22:22:25
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匿名

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4楼2017-04-12 23:28:23
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jcstone1027

铁杆木虫 (正式写手)

木虫

【答案】应助回帖

经常做定点突变，这个是正常的，因为全质粒太大了以及退火温度的不确定性，这个是很有可能的，建议是换下引物，做一下温度梯度，加大酶量，就可以出来了。
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学习，交流
5楼2017-04-13 09:10:16
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18734780938

铁虫 (初入文坛)
请问定点突变扩增出来，转化，挑单克隆测序，在引物附近多出一段是怎么回事？出现好几次了~做十个定点突变有五个都是这样的,不知道大家有什么好的解决办法？？？
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6楼2017-11-09 15:02:37
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吧哒的小哒吧

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 18734780938 at 2017-11-09 15:02:37
请问定点突变扩增出来，转化，挑单克隆测序，在引物附近多出一段是怎么回事？出现好几次了~做十个定点突变有五个都是这样的,不知道大家有什么好的解决办法？？？

你好我也遇到同样的问题 请问您现在解决了吗

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7楼2018-03-01 16:59:50
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