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苦B小书僧

新虫 (初入文坛)

[求助] 定点突变全质粒扩增,引物设计没问题,扩增不出来目的条带已有3人参与

最近开始做定点突变,采用的全质粒扩增方法,但是一直没能扩增到目的条带,或者目的条带非常淡,请假下大家有没有遇到类似情况?有哪些可能原因导致这种情况啊?最终是怎么解决的?

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werq63

金虫 (著名写手)

如果质粒太大,还是不建议扩增整个质粒

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2楼2017-04-12 22:21:59
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werq63

金虫 (著名写手)

可以选一些比较好用的酶切位点设计两对引物

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3楼2017-04-12 22:22:25
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匿名

用户注销 (小有名气)

本帖仅楼主可见
4楼2017-04-12 23:28:23
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jcstone1027

铁杆木虫 (正式写手)

木虫

【答案】应助回帖

经常做定点突变,这个是正常的,因为全质粒太大了以及退火温度的不确定性,这个是很有可能的,建议是换下引物,做一下温度梯度,加大酶量,就可以出来了。
学习,交流
5楼2017-04-13 09:10:16
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18734780938

铁虫 (初入文坛)

请问定点突变扩增出来,转化,挑单克隆测序,在引物附近多出一段是怎么回事?出现好几次了~做十个定点突变有五个都是这样的,不知道大家有什么好的解决办法???
6楼2017-11-09 15:02:37
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吧哒的小哒吧

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 18734780938 at 2017-11-09 15:02:37
请问定点突变扩增出来,转化,挑单克隆测序,在引物附近多出一段是怎么回事?出现好几次了~做十个定点突变有五个都是这样的,不知道大家有什么好的解决办法???

你好我也遇到同样的问题 请问您现在解决了吗

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7楼2018-03-01 16:59:50
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