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关于全质粒PCR进行定点突变，一测序就不对 已有1人参与
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| 我用全质粒PCR定点突变的方法，质粒大小7.7Kb，能够扩增出条带，转化后，菌落PCR验证也对，提质粒双酶切验证也对，可是一测序，就错，有额外突变，做了几次都突变。这是怎么回事呢？因为扩增片段太大，酶的能力不行吗，我用的PFU？可是我看网上好多人也这么做，怎么就不突变呢，都说挺简单就做出来 |
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