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tea11111

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于全质粒PCR进行定点突变，一测序就不对 已有1人参与

我用全质粒PCR定点突变的方法，质粒大小7.7Kb，能够扩增出条带，转化后，菌落PCR验证也对，提质粒双酶切验证也对，可是一测序，就错，有额外突变，做了几次都突变。这是怎么回事呢？因为扩增片段太大，酶的能力不行吗，我用的PFU？可是我看网上好多人也这么做，怎么就不突变呢，都说挺简单就做出来
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1楼 2015-08-05 09:28:20
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情毒之殇

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
会不会是突变的地方跟基因其他地方有相同片段，这样设计的引物或许在这几个地方都会结合上去
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我们的心是荒野还是沃土？！
2楼2015-08-05 10:59:23
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