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苦B小书僧

新虫 (初入文坛)

[求助] 定点突变全质粒扩增,引物设计没问题,扩增不出来目的条带已有3人参与

最近开始做定点突变,采用的全质粒扩增方法,但是一直没能扩增到目的条带,或者目的条带非常淡,请假下大家有没有遇到类似情况?有哪些可能原因导致这种情况啊?最终是怎么解决的?

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werq63

金虫 (著名写手)

可以选一些比较好用的酶切位点设计两对引物

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3楼2017-04-12 22:22:25
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werq63

金虫 (著名写手)

如果质粒太大,还是不建议扩增整个质粒

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2楼2017-04-12 22:21:59
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匿名

用户注销 (小有名气)

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4楼2017-04-12 23:28:23
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jcstone1027

铁杆木虫 (正式写手)

木虫

【答案】应助回帖

经常做定点突变,这个是正常的,因为全质粒太大了以及退火温度的不确定性,这个是很有可能的,建议是换下引物,做一下温度梯度,加大酶量,就可以出来了。
学习,交流
5楼2017-04-13 09:10:16
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