24小时热门版块排行榜    

查看: 1235  |  回复: 9

璐璐虫

新虫 (初入文坛)

[求助] DE3细胞表达不出来我要的蛋白了,求助啊 已有1人参与

本人目前在做毕设,是从大肠杆菌DE3细胞表达一种蛋白,用IPTG诱导,刚开始做少量表达时还有,可是到后来大量时表达量就很少,做了很多次都做不出来,要送去测序了,不知道大家有什么看法啊

@天使托 发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一开始没有经过诱导?诱导之后可能由于表达量太高形成包涵体了,你可以验证一下
···
2楼2017-04-06 12:26:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zkapan

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

3楼2017-04-06 23:49:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

璐璐虫

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小冀- at 2017-04-06 12:26:29
一开始没有经过诱导?诱导之后可能由于表达量太高形成包涵体了,你可以验证一下

不知道啊,破碎后的细胞沉淀跑胶都没有要的蛋白

发自小木虫Android客户端
4楼2017-04-07 22:40:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
4楼: Originally posted by 璐璐虫 at 2017-04-07 22:40:02
不知道啊,破碎后的细胞沉淀跑胶都没有要的蛋白
...

如果是这样的话可能就是没表达,你看一下质粒构建的对不对

发自小木虫Android客户端
···
5楼2017-04-07 22:45:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

璐璐虫

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 小冀- at 2017-04-07 22:45:04
如果是这样的话可能就是没表达,你看一下质粒构建的对不对
...

如果是质粒的问题话,那一开始做少量培养基培养表达时能看见沉淀里面有,上清也可以看到一点,只是少量的没有纯化也不十分确定是不是

发自小木虫Android客户端
6楼2017-04-07 22:48:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
6楼: Originally posted by 璐璐虫 at 2017-04-07 22:48:55
如果是质粒的问题话,那一开始做少量培养基培养表达时能看见沉淀里面有,上清也可以看到一点,只是少量的没有纯化也不十分确定是不是
...

怎么这么怪,会不会一开始那个就不是啊,要不再试一次吧

发自小木虫Android客户端
···
7楼2017-04-07 22:57:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

璐璐虫

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 小冀- at 2017-04-07 22:57:24
怎么这么怪,会不会一开始那个就不是啊,要不再试一次吧
...

一直在试,很怪出不来,先送去测序了,你说质粒它自己会不会突变啊

发自小木虫Android客户端
8楼2017-04-07 23:01:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
8楼: Originally posted by 璐璐虫 at 2017-04-07 23:01:33
一直在试,很怪出不来,先送去测序了,你说质粒它自己会不会突变啊
...

几率没有那么大吧

发自小木虫Android客户端
···
9楼2017-04-07 23:05:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

向日葵子

新虫 (初入文坛)

请问您解决了吗,我也遇到同样的问题

发自小木虫Android客户端
10楼2018-03-20 14:36:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 璐璐虫 的主题更新
信息提示
请填处理意见