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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » DE3细胞表达不出来我要的蛋白了，求助啊
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璐璐虫

新虫 (初入文坛)

[求助] DE3细胞表达不出来我要的蛋白了，求助啊 已有1人参与

本人目前在做毕设，是从大肠杆菌DE3细胞表达一种蛋白，用IPTG诱导，刚开始做少量表达时还有，可是到后来大量时表达量就很少，做了很多次都做不出来，要送去测序了，不知道大家有什么看法啊

@天使托 发自小木虫Android客户端
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1楼 2017-04-05 16:11:39
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小冀-

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一开始没有经过诱导？诱导之后可能由于表达量太高形成包涵体了，你可以验证一下
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2楼2017-04-06 12:26:29
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zkapan

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2017-04-06 23:49:20
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璐璐虫

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by 小冀- at 2017-04-06 12:26:29
一开始没有经过诱导？诱导之后可能由于表达量太高形成包涵体了，你可以验证一下

不知道啊，破碎后的细胞沉淀跑胶都没有要的蛋白

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4楼2017-04-07 22:40:02
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小冀-

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4楼: Originally posted by 璐璐虫 at 2017-04-07 22:40:02
不知道啊，破碎后的细胞沉淀跑胶都没有要的蛋白
...

如果是这样的话可能就是没表达，你看一下质粒构建的对不对

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5楼2017-04-07 22:45:04
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璐璐虫

新虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by 小冀- at 2017-04-07 22:45:04
如果是这样的话可能就是没表达，你看一下质粒构建的对不对
...

如果是质粒的问题话，那一开始做少量培养基培养表达时能看见沉淀里面有，上清也可以看到一点，只是少量的没有纯化也不十分确定是不是

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6楼2017-04-07 22:48:55
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小冀-

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6楼: Originally posted by 璐璐虫 at 2017-04-07 22:48:55
如果是质粒的问题话，那一开始做少量培养基培养表达时能看见沉淀里面有，上清也可以看到一点，只是少量的没有纯化也不十分确定是不是
...

怎么这么怪，会不会一开始那个就不是啊，要不再试一次吧

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7楼2017-04-07 22:57:24
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璐璐虫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 小冀- at 2017-04-07 22:57:24
怎么这么怪，会不会一开始那个就不是啊，要不再试一次吧
...

一直在试，很怪出不来，先送去测序了，你说质粒它自己会不会突变啊

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8楼2017-04-07 23:01:33
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小冀-

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8楼: Originally posted by 璐璐虫 at 2017-04-07 23:01:33
一直在试，很怪出不来，先送去测序了，你说质粒它自己会不会突变啊
...

几率没有那么大吧

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9楼2017-04-07 23:05:55
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向日葵子

新虫 (初入文坛)
请问您解决了吗，我也遇到同样的问题

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10楼2018-03-20 14:36:10
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