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辛辰昊

金虫 (小有名气)

[求助] 定点突变PCR失败,找不到原因已有4人参与

我现在做一步PCR突变所遇到的问题是,在PCR和DpnI处理后转到JM109中,实验组都在抗性平板上长出来了,且对照组并没有长(对照组是质粒模板用DpnI处理相同时间后的产物),做完以后送去测序,一部分突变点成功突变了,一部分没有(完全跟模板一样)。让我费解的是,既然对照组没长,就说明DpnI消化没问题,那么实验组长出来的应该都是成功的突变体,可是为什么测序后发现会有失败呢?请指教,谢谢!
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路人甲007

木虫 (正式写手)

小七

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的对照组是怎么设置的
与人玫瑰手有余香
4楼2017-04-06 15:45:57
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR没有产生突变。有目的克隆就行了。
2楼2017-04-05 16:20:01
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辛辰昊

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-04-05 16:20:01
PCR没有产生突变。有目的克隆就行了。

您好,我就是要做定点突变,现在的问题是,用含有突变点的引物做PCR,得到的产物却不含突变点。
3楼2017-04-06 09:45:26
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 辛辰昊 at 2017-04-06 09:45:26
您好,我就是要做定点突变,现在的问题是,用含有突变点的引物做PCR,得到的产物却不含突变点。...

你的模板加的太多,另外,引物有没有问题

发自小木虫Android客户端
我选择,我喜欢;我喜欢我的选择。
5楼2017-04-06 16:53:47
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