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定点突变PCR失败,找不到原因已有4人参与
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| 我现在做一步PCR突变所遇到的问题是,在PCR和DpnI处理后转到JM109中,实验组都在抗性平板上长出来了,且对照组并没有长(对照组是质粒模板用DpnI处理相同时间后的产物),做完以后送去测序,一部分突变点成功突变了,一部分没有(完全跟模板一样)。让我费解的是,既然对照组没长,就说明DpnI消化没问题,那么实验组长出来的应该都是成功的突变体,可是为什么测序后发现会有失败呢?请指教,谢谢! |
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