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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物纯化
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M-小妮儿

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物纯化 已有2人参与

用Takara的PCR纯化试剂盒纯化以cDNA为模板的pcr产物，结果纯化后260/280在1.4-1.5之间，260/230＜1，没有峰，浓度只有十几ng/ul。纯化之前的260/280在1.8左右，浓度在400ng/ul左右。也试过胶回收的试剂盒，效果也不好。

@biostar2009 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2017-04-04 17:26:54
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18716248350

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by M-小妮儿 at 2017-04-06 19:54:23
谢谢，65℃水浴5分钟可以吗？反正就是每个步骤都要多等待几分钟是吧。我的mRNA260/280在1.9左右，但是260/230只有0.5左右，会不会对后续的操作有影响？
...

最好烤箱，水浴会有水蒸气。浓度还可以的话，可以试试。我没做过RNA。做过DNA。有时候260/230不是很好还是继续往下做了的
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5楼2017-04-06 20:07:00
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18716248350

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-04-06 20:44:00
做PCR时多扩几管，25ul体系我一般都扩8管，然后胶回收，吸附时放5分钟，然后回收一遍。加了漂洗液开盖放5分钟有利于酒精挥发。空管离心后我都会放65°烤箱8分钟。洗脱加了水后也放5分钟，有利于洗脱。
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M-小妮儿
2楼2017-04-05 15:50:24
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狗狗狗尾巴草

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以考虑磁珠纯化
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3楼2017-04-06 09:59:17
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M-小妮儿

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 18716248350 at 2017-04-06 20:07:00
最好烤箱，水浴会有水蒸气。浓度还可以的话，可以试试。我没做过RNA。做过DNA。有时候260/230不是很好还是继续往下做了的...

好的，我多65℃试试，之前几次也都多等待5分钟了，但是效果还是不好，230 260 280值都特别低。PCR的8管您是纯化的时候混合在一起 然后进行后续的纯化操作吗？

发自小木虫IOS客户端
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6楼2017-04-06 20:50:42
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