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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » pET-duet-1载体求助
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细胞的世界

新虫 (初入文坛)

[求助] pET-duet-1载体求助 已有2人参与

各位虫友，我想问下pET-duet-1载体的一些情况，这个载体是一次用。我已经成功的把两段目的基因构建到pET-duet-1载体上，然后用BL21菌株在16℃，20小时条件下用IPTG诱导表达,结果两段基因都没有检测到表达蛋白。想问虫友们有没有谁用过这个载体？遇到蛋白不表达怎么办？有没有pET-duet-1载体表达蛋白的相关文献？还希望各位虫友们不吝赐教，谢谢大家！

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1楼 2017-03-28 13:45:51
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细胞的世界

新虫 (初入文坛)


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2楼2017-03-28 17:19:47
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细胞的世界

新虫 (初入文坛)
这个载体是第一次用

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3楼2017-03-28 18:51:18
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路人甲007

木虫 (正式写手)

小七

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个载体的优势就是有两个阅读框，其他的地方跟别的载体一样
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与人玫瑰手有余香
4楼2017-03-28 23:04:49
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chenshuai1238

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
check一下你的菌的生长情况，很可能是你的目的蛋白质对于细菌有毒性。这个是首先要check的。第二个就是检测是否表达的时候，可以让表达温度不要太低，或者IPTG的量稍微提高一些。我通常都是37度表达4h，跑胶检测是否表达。
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5楼2017-03-29 11:11:33
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