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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 设计引物问题
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喵喵咪鱼

银虫 (小有名气)

[交流] 设计引物问题

设计引物后PCR，然后连载体测序，但是得到的序列与目的序列差的很大，而且找不到引物序列。我反复检查了，设计的引物在几个远缘物种中很保守。应该没错呀。

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1楼 2017-03-23 19:08:38
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
没连上

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2楼2017-03-23 23:39:44
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育种小飞

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
PCR产物纯化了吗？

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3楼2017-03-24 00:04:59
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喵喵咪鱼

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 育种小飞 at 2017-03-24 00:04:59
PCR产物纯化了吗？

胶回收的。

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4楼2017-03-24 06:13:33
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喵喵咪鱼

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2017-03-23 23:39:44
没连上

两端还有载体序列。

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5楼2017-03-24 06:14:03
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一般做过PCR后用试剂盒回收最好，除非有非特异带才做胶回收，直接酶切链接就可以，你把你比对的图上传一个看看

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6楼2017-03-24 08:15:54
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fudan671

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
基因测序如果不是载体引物的话将会从你给的引物处进行测试，所以开始测试的前50个碱基都是错误的。
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7楼2017-03-24 18:17:32
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喵喵咪鱼

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by fudan671 at 2017-03-24 18:17:32
基因测序如果不是载体引物的话将会从你给的引物处进行测试，所以开始测试的前50个碱基都是错误的。

是载体的通用引物。

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8楼2017-03-24 20:16:38
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喵喵咪鱼

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2017-03-24 08:15:54
一般做过PCR后用试剂盒回收最好，除非有非特异带才做胶回收，直接酶切链接就可以，你把你比对的图上传一个看看

就是BLAST了一条很莫名其妙的序列，我要的没有。

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9楼2017-03-24 20:18:45
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六维空想

新虫 (小有名气)
★
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用载体通用引物测序  靠近引物的几十bp可能不准确

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10楼2017-03-25 15:16:41
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