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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR换高保真酶就打死p不出来正确长度的产物，，
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爱吃橘子的sj

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR换高保真酶就打死p不出来正确长度的产物，， 已有2人参与

之前用艾德莱的taq酶优化条件就p出来了，长度也对1200多，换了takara的 primer star  hs高保真酶就打死p出来长度就是2000或者大于两千，或者弥散还有什么都没有，江湖救急啊，给点建议

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1楼 2017-03-23 18:35:38
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-25 23:00:05
多备几种酶。的确有时候挑酶。我在用toyobo的KOD-FX，蛮强悍的，迄今还没发生过P不出来的情况，突变率很低。推荐。
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2楼2017-03-23 20:40:41
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
都做出来了。为什么好玩换酶，如果是突变多的话，多筛单克隆就可以解决，实在不行用一般的保真酶试试

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3楼2017-03-23 23:26:01
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poog502

木虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-25 23:00:23
这个应该和酶，甚至跑电泳的机器都有关系，尽量和当时扩增出来时的条件一致。

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6楼2017-03-25 09:17:30
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爱吃橘子的sj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by poog502 at 2017-03-25 09:17:30
这个应该和酶，甚至跑电泳的机器都有关系，尽量和当时扩增出来时的条件一致。

一致的，但是模板没有了，新换了模板呢，，

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11楼2017-03-26 15:20:12
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普通回帖

爱吃橘子的sj

新虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2017-03-23 23:26:01
都做出来了。为什么好玩换酶，如果是突变多的话，多筛单克隆就可以解决，实在不行用一般的保真酶试试

因为老师说测序，要用高保真酶

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4楼2017-03-24 13:47:30
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爱吃橘子的sj

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2017-03-23 20:40:41
多备几种酶。的确有时候挑酶。我在用toyobo的KOD-FX，蛮强悍的，迄今还没发生过P不出来的情况，突变率很低。推荐。

我们老师觉得这个应该没有问题，是我操作和条件没有晒好

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5楼2017-03-24 14:50:26
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-25 23:00:36
我们去年也是这种情况，用taq酶很容易就扩出来了，后来用takara的高保真酶怎么也没扩出来。

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知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
7楼2017-03-25 17:40:09
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poog502

木虫 (正式写手)
建议同时采用普通taq酶和高保真酶同时在原来优化的机器上跑同时跑一遍。

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8楼2017-03-26 08:50:28
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爱吃橘子的sj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2017-03-25 17:40:09
我们去年也是这种情况，用taq酶很容易就扩出来了，后来用takara的高保真酶怎么也没扩出来。

那你们怎么办的啊

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9楼2017-03-26 15:18:54
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爱吃橘子的sj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by poog502 at 2017-03-26 08:50:28
建议同时采用普通taq酶和高保真酶同时在原来优化的机器上跑同时跑一遍。

回去试试

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10楼2017-03-26 15:19:20
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