24小时热门版块排行榜    

查看: 3537  |  回复: 15

爱吃橘子的sj

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR换高保真酶就打死p不出来正确长度的产物,, 已有2人参与

之前用艾德莱的taq酶优化条件就p出来了,长度也对1200多,换了takara的 primer star  hs高保真酶就打死p出来长度就是2000或者大于两千,或者弥散还有什么都没有,江湖救急啊,给点建议

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-25 23:00:05
多备几种酶。的确有时候挑酶。我在用toyobo的KOD-FX,蛮强悍的,迄今还没发生过P不出来的情况,突变率很低。推荐。
2楼2017-03-23 20:40:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

都做出来了。为什么好玩换酶,如果是突变多的话,多筛单克隆就可以解决,实在不行用一般的保真酶试试

发自小木虫Android客户端
3楼2017-03-23 23:26:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

poog502

木虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-25 23:00:23
这个应该和酶,甚至跑电泳的机器都有关系,尽量和当时扩增出来时的条件一致。

发自小木虫Android客户端
6楼2017-03-25 09:17:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱吃橘子的sj

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by poog502 at 2017-03-25 09:17:30
这个应该和酶,甚至跑电泳的机器都有关系,尽量和当时扩增出来时的条件一致。

一致的,但是模板没有了,新换了模板呢,,

发自小木虫Android客户端
11楼2017-03-26 15:20:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

爱吃橘子的sj

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2017-03-23 23:26:01
都做出来了。为什么好玩换酶,如果是突变多的话,多筛单克隆就可以解决,实在不行用一般的保真酶试试

因为老师说测序,要用高保真酶

发自小木虫Android客户端
4楼2017-03-24 13:47:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱吃橘子的sj

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2017-03-23 20:40:41
多备几种酶。的确有时候挑酶。我在用toyobo的KOD-FX,蛮强悍的,迄今还没发生过P不出来的情况,突变率很低。推荐。

我们老师觉得这个应该没有问题,是我操作和条件没有晒好

发自小木虫Android客户端
5楼2017-03-24 14:50:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-25 23:00:36
我们去年也是这种情况,用taq酶很容易就扩出来了,后来用takara的高保真酶怎么也没扩出来。

发自小木虫Android客户端
知识就像蒲公英的花儿一样,播种在世界的每一个角落。
7楼2017-03-25 17:40:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

poog502

木虫 (正式写手)

建议同时采用普通taq酶和高保真酶同时在原来优化的机器上跑同时跑一遍。

发自小木虫Android客户端
8楼2017-03-26 08:50:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱吃橘子的sj

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2017-03-25 17:40:09
我们去年也是这种情况,用taq酶很容易就扩出来了,后来用takara的高保真酶怎么也没扩出来。

那你们怎么办的啊

发自小木虫Android客户端
9楼2017-03-26 15:18:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱吃橘子的sj

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by poog502 at 2017-03-26 08:50:28
建议同时采用普通taq酶和高保真酶同时在原来优化的机器上跑同时跑一遍。

回去试试

发自小木虫Android客户端
10楼2017-03-26 15:19:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 爱吃橘子的sj 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 4/200 2026-08-17 11:46 by 4GBAYCdVQoK3
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +7 zju2000 2026-08-16 7/350 2026-08-17 11:31 by Iktsuarpok9
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +10 Ldrop2023 2026-08-13 10/500 2026-08-17 09:59 by 小豌豆_发芽
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 3/150 2026-08-17 09:49 by xLVPIRuSvCUe
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
信息提示
请填处理意见