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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用无缝克隆吧。。。方便,假阳性率很低。
11楼2017-03-23 10:59:20
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时光、过客

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by 小冀- at 2017-03-23 09:01:17
可能没连上吧,我们大片段做的时候摩尔浓度一般用5:1或者10:1,多得是片段,片段比较大的不太好连

请问摩尔浓度比例具体怎么算?需要算上片段大小吗?

发自小木虫Android客户端
12楼2017-03-23 11:38:28
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
12楼: Originally posted by 时光、过客 at 2017-03-23 11:38:28
请问摩尔浓度比例具体怎么算?需要算上片段大小吗?
...

你先看看这个吧https://wenku.baidu.com/view/f6a0f8c390c69ec3d5bb75e6
···
13楼2017-03-23 14:40:16
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秉秉的法兰西

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by mmqlhy at 2017-03-23 01:40:12
有过两次假阳性,其余几次都是不长菌
...

我之前连过六千多的片段。我当时的载体是八千多,也是连了好久连不上,后来在片段中间找了个酶切位点,切下来。相当于三个东西一起连。终于做出来了。按照这个方法。一口气做出来四个这种克隆。你这个可以把比例换过来试试啊,毕竟你是片段大于载体。还有感受态的转化效率要高啊。

发自小木虫Android客户端
14楼2017-03-23 15:06:10
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时光、过客

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by 秉秉的法兰西 at 2017-03-23 15:06:10
我之前连过六千多的片段。我当时的载体是八千多,也是连了好久连不上,后来在片段中间找了个酶切位点,切下来。相当于三个东西一起连。终于做出来了。按照这个方法。一口气做出来四个这种克隆。你这个可以把比例换 ...

请问什么是在片段中间找了个酶切位点啊?那不是把目的片段切断了么

发自小木虫Android客户端
15楼2017-03-23 15:47:03
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mars199026

铜虫 (初入文坛)

建议你试试提高连接模板浓度,或者换一个好一点的连接酶,最后试试不同条件的转化!2.5kb加在3.2kb上时候还是很顺利的

发自小木虫Android客户端
16楼2017-03-23 15:48:30
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mmqlhy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2017-03-23 10:59:20
用无缝克隆吧。。。方便,假阳性率很低。

Gibson?

发自小木虫IOS客户端
17楼2017-03-23 22:26:10
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mmqlhy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 时光、过客 at 2017-03-23 11:38:28
请问摩尔浓度比例具体怎么算?需要算上片段大小吗?
...

可以用NEB CALCULATOR

发自小木虫IOS客户端
18楼2017-03-23 22:27:41
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实验李七七

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 秉秉的法兰西 at 2017-03-23 15:06:10
我之前连过六千多的片段。我当时的载体是八千多,也是连了好久连不上,后来在片段中间找了个酶切位点,切下来。相当于三个东西一起连。终于做出来了。按照这个方法。一口气做出来四个这种克隆。你这个可以把比例换 ...

请问你是怎么三个一起连接的?
是把两个片段和载体都加在一起吗?那么体系是什么样的呢?
谢谢
19楼2017-11-02 23:48:39
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