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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 大片段基因连接，转化问题
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mmqlhy

新虫 (初入文坛)

[求助] 大片段基因连接，转化问题 已有4人参与

我想把一个6.5kb的片段倒入4.7kb的载体中，insert 是从一个质粒上切下来的，保证有相同的酶切位点，连接体系试过1:1，2:1, 3:1，热激，都不成功，已经做了快俩月了，求大神帮忙！

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1楼 2017-03-22 21:47:11
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mmqlhy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by borrysa at 2017-03-23 09:08:32
试试减少载体的量，加CIAP 处理。
试试5:1体系，连接过夜。
...

载体自连还是比较少的，阴性对照板上只有4个菌落，我一直以为大片段连接在1:1到3:1，主要我的插入片段比载体大

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9楼2017-03-23 10:36:12
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秉秉的法兰西

新虫 (小有名气)
怎么个不成功法？

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2楼2017-03-22 23:44:45
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秉秉的法兰西

新虫 (小有名气)
是不长菌，还是都是假阳性？

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3楼2017-03-22 23:45:21
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mmqlhy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 秉秉的法兰西 at 2017-03-22 23:44:45
怎么个不成功法？

有过两次假阳性，其余几次都是不长菌

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4楼2017-03-23 01:40:12
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