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oveiyi

金虫 (小有名气)

[交流] 请问测酶活力的方法有哪些

请高手赐教,谢了

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2004371310

木虫 (著名写手)

一般是加相应的底物进行反应,看底物在单位时间内被水解或者转化的量来确定酶的活力。
2楼2008-12-27 00:12:44
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pingtinglv

银虫 (初入文坛)

酶活力的测定方法
  终点法
  动力法
  紫外可见分光光度法
  荧光分光光度法
  酶偶联法
  电化学法
3楼2008-12-27 00:13:37
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ocean1225

金虫 (小有名气)

主要就是楼上说的几种方法,每种方法各有优缺点

不过关键要看你自己的体系,所要求的精确度,拥有的仪器设备,找出最合适的!

建议找专著看看,会讲的比较详细,对你比较有帮助!呵呵(个人意见)
书山有路勤为径,学海无涯苦作舟。
4楼2008-12-27 08:42:56
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蓝色基因

金虫 (正式写手)

如果酶不一样的话,具体测试过程中要加的东西也不一样的。
打具体还是上面2楼说的几种方法。
5楼2008-12-27 11:17:38
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wgs5

铁虫 (正式写手)

不知道有用还是没用

有还原糖法、粘度法、色原底物法和放射琼脂扩散法等。还原糖法是测量一种酶在其特定基质上“切断”的数目,该方法已被证明比较准确并且可再复制,是常被使用的一种方法;粘度法的原理在本质上是相同的,但偏向那些可切断基质中间位置的酶,该方法非常费时而且比较复杂;其它方法重复性差,费时,操作复杂,反应颜色不稳定,而且单位难以换算成酶活力单位。
   本方法在大量试验的基础上,选择了反应颜色稳定性好,操作简单的还原糖法。其中,酸性蛋白酶的测定采用通用方法——分光光度法。
   酶活力的试验方法涉及到酶活力的定义、底物、测定温度、PH值、反应时间、测定方法等多种因素。为使试验结果能相互比较,本方法对酶活力的定义、底物等各种因素分别进行了规定。在对饲用复合酶制剂的研究中,根据各种酶的特性,结合实际情况,确定了酶活力试验的最适反应温度、PH值、反应时间。
6楼2008-12-27 12:41:02
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yuewuyang

铜虫 (小有名气)

采用Search-PAGE在分离胶中加入淀粉作为糖化酶的作用底物,电泳结束后温浴一定时间,糖化酶所在部位胶板中的淀粉被酶解,其余部分的淀粉依然存在,碘液染色后,糖化酶存在的部位呈现透明区域,没有被水解的部位则被染成蓝色,每块胶板1次可筛选出8~15个样品
7楼2008-12-28 08:57:20
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yuewuyang

铜虫 (小有名气)

测定方法有;滤纸崩溃法,总糖比色法,粘度法……等。滤纸崩溃法属于定性检测,总糖比色法重点反映C1与C0的协调作用,粘度法重点反映Cx与C1的协调作用,两者都可以用作定量测定。至今活力测定尚未有统一的方法,表示活力大小的计量单位更是多种多样,丹麦Novodisk(诺和诺得公司)早期采用总糖比色法(AF187.2/1-GB 82-08-10)一分钟水解产生1μmol葡萄糖称为一个NCU活力单位(NCU=NOVO Cellulase Unit)。后来又采用粘度法(AF275/1-GB1989-02-03)用一种活力为880 EGU的内切葡聚糖酶,以其作用于CMC的粘度曲线为对比标准,测得的对应值以EGU/克作为一个内切酶活力单位(EGU=Endo Glucase Unit)。纺织染整行业应用酶处理技术已有多年,但还没有建立起酶的活力测定方法,无法检出酶商品的好坏,不能检查酶的储存稳定性,失去了制订酶处理工艺配方的科学依据。对于使用厂来说,迫切需要有一个简便的,统一的,实用的工艺检测方法。有鉴于此,二年多来我们在测试方面做了一些探索,现在可以认为;采用一般的CMC粘度测试法,以CMC的浓度———粘度关系曲线作为对应,定出酶的活力计算单位。可以用作对酶商品的考核。
8楼2008-12-28 09:05:09
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wangdongd

金虫 (小有名气)

这个要根据不同的酶来定的,比如漆酶,现在比较流行的是ABTS为底物,加入一定量的酶启动液,用紫外分光光度计测每分钟的吸光值,测量大概5-6组数据,再根据计算公式就可以知道酶活了。所以你可以看看与你相关的酶的文献,然后再找到合适的底物测酶活。
9楼2008-12-28 09:56:37
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