应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 我在做融合pcr，可是结果一直不好。
281/1返回列表
查看: 5189  |  回复: 27
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

づ迷糊ぷ娃娃

新虫 (初入文坛)

[交流] 我在做融合pcr，可是结果一直不好。

我在做融合pcr，左边的四个是一个2600bp和一个1100bp的融合...marker后面，也就是右边的四个，做的是两个1100bp左右的融合…可是……左边的总是点样孔很亮，可是，目的片段很弱。右边的，整体就没有条带。应该怎么办？

我在做融合pcr，可是结果一直不好。


发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

青大好汉

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2017-03-14 10:28:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yt7777

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by yt7777 at 2017-03-15 00:03:22
做个梯度吧  摸一下条件

做个Tm梯度摸一下Tm，建议最好是确定两个片段都p出来了，做一个纯化，然后进行第二轮pcr

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2017-03-17 23:38:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

borrysa

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
19楼: Originally posted by づ迷糊ぷ娃娃 at 2017-03-18 01:45:27
你在国外呀？好厉害的说。。。我一直在头疼我这个融合PCR，总是睡不好。
...

没事，我之前也一直在做overlapping pcr，咱们可以交流下

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
20楼2017-03-18 01:47:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

青大好汉

银虫 (小有名气)
★
づ迷糊ぷ娃娃(金币+1): 谢谢参与
我也是哎，解决了吗，楼主
赞一下 回复此楼
2楼2017-03-14 13:40:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

渭城朝风

新虫 (初入文坛)
★
づ迷糊ぷ娃娃(金币+1): 谢谢参与
重叠PCR吧，先把两条片段和扩增出来，在以此为模板，在融合PCR，不要模板太多
赞一下 回复此楼
3楼2017-03-14 15:17:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

绝对零度的笑

木虫 (正式写手)
★
づ迷糊ぷ娃娃(金币+1): 谢谢参与
觉得差不多大小的位置切胶回收，再用两端的引物重新PCR一下。
赞一下 回复此楼
4楼2017-03-14 23:27:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

borrysa

金虫 (正式写手)
★
づ迷糊ぷ娃娃(金币+1): 谢谢参与
或者用touch downPcr试试

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-03-14 23:51:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yt7777

金虫 (小有名气)
★
づ迷糊ぷ娃娃(金币+1): 谢谢参与
做个梯度吧  摸一下条件

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
6楼2017-03-15 00:03:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

づ迷糊ぷ娃娃

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 青大好汉 at 2017-03-14 13:40:56
我也是哎，解决了吗，楼主

没有解决呢。。。愁死了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2017-03-17 14:50:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

づ迷糊ぷ娃娃

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by borrysa at 2017-03-14 23:51:54
或者用touch downPcr试试

我不太了解，是什么意思

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2017-03-17 14:51:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

づ迷糊ぷ娃娃

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yt7777 at 2017-03-15 00:03:22
做个梯度吧  摸一下条件

做哪些条件的梯度，是退火温度和模板的量么？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2017-03-17 14:51:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

づ迷糊ぷ娃娃

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 渭城朝风 at 2017-03-14 15:17:55
重叠PCR吧，先把两条片段和扩增出来，在以此为模板，在融合PCR，不要模板太多

是这么做的，模板的话，长的一个片段2微升，短的片段3微升

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2017-03-17 14:52:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

づ迷糊ぷ娃娃

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-03-14 23:27:59
觉得差不多大小的位置切胶回收，再用两端的引物重新PCR一下。

感觉量少的可怜，等回收出来，是不是就回收丢了。。。而且，回来出来的话，再做模板的时候加多少量呢，，会不会太少了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
11楼2017-03-17 14:53:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

borrysa

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by づ迷糊ぷ娃娃 at 2017-03-17 14:51:00
我不太了解，是什么意思
...

就是说先P 5-10cycle 用高一点的退火温度，后面用低一点的温度。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
13楼2017-03-18 00:53:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

づ迷糊ぷ娃娃

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by borrysa at 2017-03-18 00:53:36
就是说先P 5-10cycle 用高一点的退火温度，后面用低一点的温度。
...

那我用把前10个循环的产物回收吗？还是直接拿来当模板？？？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
14楼2017-03-18 01:00:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

borrysa

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by づ迷糊ぷ娃娃 at 2017-03-18 01:00:38
那我用把前10个循环的产物回收吗？还是直接拿来当模板？？？
...

直接跑，像下图这样设程序
我在做融合pcr，可是结果一直不好。-1



发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
15楼2017-03-18 01:42:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

づ迷糊ぷ娃娃

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by borrysa at 2017-03-18 01:42:26
直接跑，像下图这样设程序

...

我试试，谢谢

发自小木虫Android客户端
回复此楼
16楼2017-03-18 01:43:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

づ迷糊ぷ娃娃

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by borrysa at 2017-03-18 01:42:26
直接跑，像下图这样设程序

...

竟然还没睡~

发自小木虫Android客户端
回复此楼
17楼2017-03-18 01:43:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

borrysa

金虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by づ迷糊ぷ娃娃 at 2017-03-18 01:43:45
竟然还没睡~
...

北美时间啊！

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
18楼2017-03-18 01:44:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

づ迷糊ぷ娃娃

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by borrysa at 2017-03-18 01:44:33
北美时间啊！
...

你在国外呀？好厉害的说。。。我一直在头疼我这个融合PCR，总是睡不好。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
19楼2017-03-18 01:45:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

づ迷糊ぷ娃娃

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
20楼: Originally posted by borrysa at 2017-03-18 01:47:20
没事，我之前也一直在做overlapping pcr，咱们可以交流下
...

可是感觉看你设置的Tm值真的好高，我们一般都是55℃，所以我不知道前十个循环应该设置多少度了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
21楼2017-03-18 01:49:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

borrysa

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
21楼: Originally posted by づ迷糊ぷ娃娃 at 2017-03-18 01:49:03
可是感觉看你设置的Tm值真的好高，我们一般都是55℃，所以我不知道前十个循环应该设置多少度了
...

那要根据你的基因噢，一般是应该用低一点的温度，但是我的基因GC 含量极高，低温扩不出来。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
22楼2017-03-18 01:51:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

づ迷糊ぷ娃娃

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
22楼: Originally posted by borrysa at 2017-03-18 01:51:09
那要根据你的基因噢，一般是应该用低一点的温度，但是我的基因GC 含量极高，低温扩不出来。
...

谢谢你哦，我明天去了实验室就试试。然后引物的话就是加融合上游片段的5'引物，和融合下游的3'端引物，对不？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
23楼2017-03-18 01:55:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

borrysa

金虫 (正式写手)
引用回帖:
23楼: Originally posted by づ迷糊ぷ娃娃 at 2017-03-18 01:55:03
谢谢你哦，我明天去了实验室就试试。然后引物的话就是加融合上游片段的5'引物，和融合下游的3'端引物，对不？
...

是的！

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
24楼2017-03-18 02:05:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

萌萌笑笑

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好！最近在做融合pcr，已经得到了待融合的两个片段，请问该怎么建立接下来的融合反应体系呢？谢谢了 ！
赞一下 回复此楼
25楼2017-03-25 16:19:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

萌萌笑笑

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
20楼: Originally posted by borrysa at 2017-03-18 01:47:20
没事，我之前也一直在做overlapping pcr，咱们可以交流下
...

您好！最近在做融合PCR，目前已经得到待融合片段，但不知道接下来该如何设置反应的体系和PCR程序，希望可以得到您的指导，谢谢啦 ！
赞一下 回复此楼
26楼2017-03-25 16:23:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青大好汉

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送红花一朵
左侧融合PCR点样空处很亮，跟我的一样，楼主解决了吗？
赞一下 回复此楼
27楼2017-03-31 16:18:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨大头007

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
27楼: Originally posted by 青大好汉 at 2017-03-31 16:18:17
左侧融合PCR点样空处很亮，跟我的一样，楼主解决了吗？

我做融合PCR时也出现了加样孔很亮的情况，怎么回事，你的解决了吗？
赞一下 回复此楼
28楼2017-04-24 09:13:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 づ迷糊ぷ娃娃 的主题更新
281/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭