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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » crispr cas9
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冬柳亦绿123

新虫 (小有名气)

[求助] crispr cas9 已有4人参与

目的基因靶点序列怎样构建到载体上。？

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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1楼 2017-03-11 17:45:46
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释然Ooo

新虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-12 08:52:14
靶点序列有设计原则，可以在网上看一下，设计好之后找公司合成就可以了，然后通过酶切连接和载体连在一起

发自小木虫IOS客户端
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3楼2017-03-12 00:58:36
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR克隆下来，再重组到目的载体上。
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2楼2017-03-11 23:34:49
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leeking1113

新虫 (初入文坛)
一般还是T4链接

发自小木虫IOS客户端
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4楼2017-03-15 23:56:58
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zcliang2014

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

关键要看你所用质粒提供的可行性，是否有合适的酶切位点。如果有合适的酶切位点，对于靶序列的寡核苷酸链，可以合成引物，然后自己做个简单的退火，就可以用T4连接酶来连接。注意切载体时不要去磷酸化。如果没有合适的酶切位点，你可以自己构建一个方便操作的连接，可以考虑同源重组的无痕连接。
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5楼2017-03-20 17:24:40
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