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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » crispr cas9
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冬柳亦绿123

新虫 (小有名气)

[求助] crispr cas9 已有4人参与

目的基因靶点序列怎样构建到载体上。？

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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1楼 2017-03-11 17:45:46
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

1487298091

新虫 (初入文坛)
你看看这个，希望有用，设计，gRNA 连接
https://wenku.baidu.com/view/57074468c8d376eeaeaa31c2.html
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9楼2017-03-23 12:46:10
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普通回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR克隆下来，再重组到目的载体上。
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2楼2017-03-11 23:34:49
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释然Ooo

新虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-12 08:52:14
靶点序列有设计原则，可以在网上看一下，设计好之后找公司合成就可以了，然后通过酶切连接和载体连在一起

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3楼2017-03-12 00:58:36
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leeking1113

新虫 (初入文坛)
一般还是T4链接

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4楼2017-03-15 23:56:58
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zcliang2014

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

关键要看你所用质粒提供的可行性，是否有合适的酶切位点。如果有合适的酶切位点，对于靶序列的寡核苷酸链，可以合成引物，然后自己做个简单的退火，就可以用T4连接酶来连接。注意切载体时不要去磷酸化。如果没有合适的酶切位点，你可以自己构建一个方便操作的连接，可以考虑同源重组的无痕连接。
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5楼2017-03-20 17:24:40
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痞子无敌

金虫 (正式写手)
靠谱的方法就是 看文章，方法加supplement information应该足够让你明白，好好看

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当你当你的眼睛眯着笑
6楼2017-03-20 22:05:54
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18207496520

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

边切边连效果很好，我刚做完这个！

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7楼2017-03-21 00:03:31
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萌蛋萌蛋

新虫 (小有名气)
有没有好心人告诉我cas到底怎么读啊？是kiss还是kas？

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8楼2017-03-21 00:11:08
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琳儿

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 18207496520 at 2017-03-21 00:03:31
边切边连效果很好，我刚做完这个！

Bsa1酶切位点是怎么边切边连的？这个一直没明白
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10楼2018-11-21 09:55:03
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